Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa của cao chiết phân đoạn từ lá sa kê (artocarpus altilis) định hướng hỗ trợ điều trị bệnh gout

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN HOÀNG MINH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT PHÂN ĐOẠN TỪ LÁ SA KÊ (ARTOCARPUS ALTILIS) ĐỊNH HƯỚNG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ BỆNH GOUT Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã số: 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ Cán hướng dẫn khoa học 1: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Cán hướng dẫn khoa học 2: PGS TS Nguyễn Thúy Hương TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 01 NĂM 2019 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRUNG TÂM SÂM VÀ DƯỢC LIỆU THÀNH PHỒ HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học 1: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Cán hướng dẫn khoa học 2: PGS.TS Nguyễn Thúy Hương Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS Bùi Văn Lệ Cán chấm nhận xét 2: TS Huỳnh Ngọc Oanh Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 11 tháng 01 năm 2019 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: Chủ tịch hội đồng: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Thư ký hội đồng: PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên Ủy viên phản biện 1: PGS.TS Bùi Văn Lệ Ủy viên phản biện 2: TS Huỳnh Ngọc Oanh Ủy viên hội đồng: TS Trần Trung Hiếu Xác nhận của Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Nguyễn Đức Lượng TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC Phan Thanh Sơn Nam i ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Hoàng Minh MSHV: 1670260 Ngày, tháng, năm sinh: 20/02/1990 Nơi sinh: Sa Đéc- Đồng Tháp Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 I TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa của cao chiết phân đoạn từ Sa kê (Artocarpus altilis) theo hướng hỗ trợ điều trị bệnh gout II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Đề tài làm rõ hoạt tính sinh học của Sa kê, đồng thời tìm nguồn dược liệu ứng dụng việc hỗ trợ điều trị bệnh gout với nội dung sau:  Định lượng hàm lượng hợp chất polyphenol tổng thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa của cao chiết tổng để sàng lọc cao chiết tổng tiềm  Sàng lọc cao chiết phân đoạn thể hoạt tính chống oxy hóa tốt từ cao chiết tổng tiềm  Khảo sát tác dụng hạ acid uric máu của cao chiết phân đoạn tiềm mơ hình gây tăng acid uric máu chuột nhắt trắng đực kali oxonat III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 20/08/2018 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 10/12/2018 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn khoa học 1: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Cán hướng dẫn khoa học 2: PGS.TS Nguyễn Thúy Hương Tp HCM, ngày 11 tháng 01 năm 2019 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO Cán hướng dẫn Cán hướng dẫn Nguyễn Thị Thu Hương Nguyễn Thúy Hương Lê Thị Thủy Tiên TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC Phan Thanh Sơn Nam ii LỜI CẢM ƠN Thực tế cho thấy, thành công gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ của người xung quanh giúp đỡ hay nhiều, trực tiếp hay gián tiếp Với lịng biết ơn vơ sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Người chấp cánh cho niềm đam mê nghiên cứu từ bước bậc đại học, dùng tri thức tâm huyết của truyền đạt cho tơi định hướng, kiến thức quý báu, lời hướng dẫn tận tình để giúp tơi hồn thiện luận văn tốt nghiệp tốt Và xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Việt Dũng (Viện Dược liệu), Ths Dương Thị Mộng Ngọc, Ths Trần Mỹ Tiên, Đồn Thị Bích Thủy anh chị em Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM tạo điều kiện, hỗ trợ, động viên chia sẻ suốt thời gian qua Dưới mái trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM, không quên buổi lên lớp của thầy cô cho kiến thức thật tuyệt vời Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thúy Hương tận tâm bảo hướng dẫn tơi qua buổi học, buổi nói chuyện, thảo luận đề tài nghiên cứu Nhờ có lời động viên, hướng dẫn, dạy bảo mà luận văn của tơi hồn thành tốt Những lời dạy của cịn hành trang giúp vững bước đường nghiệp của sau Và không quên người bạn cao học khóa K2016 chia sẻ động viên vượt qua khó khăn q trình học tập Tơi xin cảm ơn thầy cô người “Ba mẹ ơi! Con bước lên nấc thang đời rồi” Tôi nghĩ nấc thang thay lời cảm ơn của gửi đến ba mẹ, chỗ dựa vững cho đường học vấn của Tôi xin cảm ơn gia đình, cảm ơn vợ tơi đồng hành chia sẻ tơi khó khăn mặt tinh thần suốt trình học tập cao học Với vốn kiến thức cịn hạn chế tơi nên viết luận văn khơng thể tránh sai sót, tơi mong nhận góp ý của q thầy để luận văn hồn thiện Tp Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 12 năm 2018 Nguyễn Hoàng Minh iii TĨM TẮT NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH CỦA CAO CHIẾT PHÂN ĐOẠN TỪ LÁ SA KÊ (ARTOCARPUS ALTILIS) ĐỊNH HƯỚNG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ BỆNH GOUT Theo kinh nghiệm dân gian, Sa kê (Artocarpus altilis (Park.) Fosb.) sử dụng thuốc điều trị bệnh gout Lá Sa kê chứa nhiều steroid, terpenoid, saponin, flavonoid, alkaloid chứng minh có hoạt tính chống oxy hóa, ức chế xanthin oxidase in vitro Do đó, đề tài tiến hành nghiên cứu tác dụng của cao chiết phân đoạn từ Sa kê theo định hướng hỗ trợ điều trị bệnh gout Đề tài tiến hành định lượng hàm lượng hợp chất polyphenol tổng đánh giá hoạt tính chống oxy hóa cao chiết nước, cao chiết ethanol 45%, cao chiết ethanol 70%, cao chiết ethanol 96% từ Sa kê Kết cho thấy cao chiết nước có hàm lượng hợp chất polyphenol (8,94 mg GAE/g dược liệu) thể hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH với IC50 = 106,95 μg/ml; ức chế peroxy hóa lipid tế bào với IC50 = 84,44 μg/ml; ức chế xanthin oxidase IC50 = 38,63 μg/ml tốt so với cao chiết tổng lại Nghiên cứu sàng lọc cao chiết ethanol 45% cao chiết tiềm để tiến hành chiết cao phân đoạn cho thử nghiệm Đề tài tiếp tục đánh giá hoạt tính chống oxy hóa cao chiết phân đoạn Kết cho thấy cao phân đoạn ethyl acetat thể hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH với IC50 = 14,02 μg/ml, ức chế peroxy hóa lipid tế bào với IC50 = 2,76 μg/ml; ức chế xanthin oxidase với IC50 = 28,48 μg/ml tốt so với cao phân đoạn diethyl ether, chloroform, n-butanol cao phân đoạn nước Nghiên cứu sàng lọc cao chiết phân đoạn ethyl acetat cao chiết phân đoạn tiềm để tiến hành thử nghiệm in vivo Đề tài tiến hành khảo sát tác dụng hạ acid uric máu của cao phân đoạn ethyl acetat mơ hình gây tăng acid uric cấp kali oxonat (liều 300 mg/kg) chuột nhắt trắng Kết cho thấy phác đồ điều trị hay dự phòng, cao phân đoạn ethyl acetat liều 0,17 g cao/kg – 0,34 g cao/kg trọng lượng chuột thể tác dụng hạ acid uric máu (17,90% - 25,91%) đạt ý nghĩa thống kê so với lô bệnh lý phục hồi trở mức bình thường, tác dụng tương tự allopurinol liều 10 mg/kg trọng lượng chuột iv ABSTRACT STUDY ON ANTIOXIDANT ACTIVITY OF THE FRACTIONATED EXTRACT FROM ARTOCARPUS ALTILIS LEAVES IN TREND OF GOUT TREATMENT According to folklore, Artocarpus altilis leaves have been used for treatment of gout It contains steroids, terpenoids, saponins, flavonoids, alkaloids, and are shown to possess active anti-oxidant, xanthine oxidase inhibitory activity in vitro Therefore, the aim of this study is to evaluate the anti-hyperuricemic effect of the extracts from Artocarpus altilis leaves in mouse model of hyperuricemia The project proceeded to quantify the total polyphenol content and evaluate antioxidant activity of 45%, 70%, 96% ethanol extract and aqueous extract of Artocarpus altilis leaves Results showed that 45% ethanol extract contained the total polyphenol content (8.94 mg GAE/g raw materials) and had the best DPPH scavenging activity (IC50 = 106.95 μg/ml), lipid peroxidation inhibitory activity (IC50 = 84.44 μg/ml), xanthine oxidase inhibitory activity (IC50 = 38.63 μg/ml) compared to all other total extracts The study was able to screen 45% ethanol extract which was a potential extract It fractionated to get diethyl ether, chloroform, ethyl acetate, n-butanol and water fractional extracts for next experiments The project evaluated anti-oxidant activity of fractional extracts Results showed that ethyl acetate fractional extract had the best DPPH scavenging activity (IC50 = 14.02 μg/ml), lipid peroxidation inhibitory activity (IC50 = 2.76 μg/ml), xanthine oxidase inhibitory activity (IC50 = 28.48 μg/ml) compared to all other fractional extracts The study was able to screen ethyl acetate fractional extract which was the potential fractional extract to proceed in vivo experiment This study investigated the anti-hyperuicemic effects of ethyl acetate fractional extract on kali oxonat (300 mg/kg weight of mice) - induced hyperuricemic model in mice The result showed that either single dose or repeated doses of ethyl acetate fractional extract at oral doses 0.17 g/kg - 0.34 g/kg weight of mice exerted a decrease on plasma uric acid (17.90% - 25.91%) which was significantly different as compared to physiological control and return to normal value as well as allopurinol (at oral dose 10 mg/kg weight kg of mice) v LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu của riêng tơi hướng dẫn của PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương PGS.TS Nguyễn Thúy Hương, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, có sai sót tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tp Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 12 năm 2018 Nguyễn Hoàng Minh vi MỤC LỤC Trang NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii ASSTRACT iv LỜI CAM ĐOAN v MỤC LỤC vi BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG x DANH MỤC CÁC HÌNH xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Sa kê 1.1.1 Danh pháp 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Hình thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Công dụng 1.1.6 Một số cơng trình ngồi nước liên quan đến nghiên cứu 1.2 Hợp chất polyphenol 1.2.1 Flavonoid 1.2.2 Tannin 10 1.3 Bệnh gout 11 1.3.1 Khái niệm bệnh gout 11 1.3.2 Xanthin oxidase 12 1.3.3 Quá trình sinh tổng hợp đào thải acid uric 14 1.3.4 Cơ chế bệnh sinh của gout 15 1.3.5 Hậu tăng acid uric 15 1.3.6 Thuốc điều trị bệnh gout 16 vii 1.4 Mơ hình thực nghiệm gây tăng acid uric máu 21 1.5 Một số dược liệu có tác dụng hạ acid uric 23 CHƯƠNG VẬT LIỆU- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Địa điểm thời gian thực đề tài 24 2.2 Vật liệu 24 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2.2 Động vật thí nghiệm 24 2.2.3 Thiết bị 24 2.2.4 Hóa chất 25 2.2.5 Dụng cụ 25 2.3 Sơ đồ nghiên cứu của đề tài 25 2.4 Thuyết minh sơ đồ nghiên cứu 26 2.4.1 Sàng lọc cao chiết tổng tiềm 26 2.4.2 Sàng lọc cao chiết phân đoạn tiềm 32 2.4.3 Khảo sát tác dụng hạ acid uric máu của cao chiết phân đoạn tiềm mơ hình gây tăng acid uric máu kali oxonat 33 2.4.4 Xử lý số liệu 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 36 3.1 Sàng lọc cao chiết tổng tiềm 36 3.1.1 Chiết xuất cao chiết tổng 36 3.1.2 Mất khối lượng làm khô của dược liệu cao chiết tổng 36 3.1.3 Hàm lượng hợp chất polyphenol tổng của cao chiết tổng 37 3.1.4 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết tổng 39 3.1.5 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của cao chiết tổng 41 3.1.6 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết tổng 44 3.2 Sàng lọc cao chiết phân đoạn tiềm 46 3.2.1 Chiết xuất cao chiết phân đoạn 46 3.2.2 Mất khối lượng làm khô của cao chiết phân đoạn 46 3.2.3 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết phân đoạn 47 3.2.4 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của cao chiết phân đoạn 48 viii 3.2.5 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết phân đoạn 50 3.3 Kết tác dụng hạ acid uric máu của cao chiết phân đoạn ethyl acetat mơ hình gây tăng acid uric máu chuột nhắt trắng kali oxonat 52 3.3.1 Kết tác dụng hạ acid uric máu của cao chiết phân đoạn ethyl acetat phác đồ điều trị 52 3.3.2 Kết tác dụng hạ acid uric máu của cao chiết phân đoạn ethyl acetat phác đồ dự phòng 54 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 57 4.1 Kết luận 57 4.2 Đề nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC Phụ lục Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH cao chiết tổng Bảng 3.1 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của acid ascorbic Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 176,130 88,065 44,032 17,613 8,806 Nồng độ phản ứng (µg/ml) Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) OD (λ = 515 nm) Lần 0,917 0,036 0,083 0,363 0,665 0,761 22,02 11,01 5,50 2,20 1,10 Lần 0,909 0,039 0,093 0,352 0,644 0,759 Lần 0,999 0,038 0,088 0,345 0,639 0,754 Trung bình ± SEM 96,08 ± 0,09 90,84 ± 0,30 63,23 ± 0,54 32,43 ± 0,82 21,12 ± 0,22 Bảng 3.2 Giá trị mật độ quang của cao chiết tổng từ Sa kê nồng độ ban đầu 2000 µg/ml thử nghiệm hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH Nồng độ ban đầu (µg/ml) Mẫu Nồng độ phản ứng (µg/ml) OD (λ = 515 nm) Lần 0,897 0,190 0,250 0,621 0,504 Control Cao chiết ethanol Cao chiết ethanol 45% Cao chiết ethanol 96 70% Cao chiết nước % 2000 2000 2000 2000 250 250 250 250 Lần 0,907 0,222 0,304 0,699 0,443 Lần 0,995 0,219 0,388 0,701 0,522 Bảng 3.3 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết ethanol 45% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 2000 1500 1000 500 250 250,00 187,50 125,00 62,50 31,25 OD (λ = 515 nm) Lần 0,907 0,897 0,504 0,190 0,250 0,621 Lần 0,869 0,907 0,443 0,222 0,304 0,699 Lần 0,977 0,995 0,522 0,219 0,388 0,701 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) 77,08 ± 0,91 68,98 ± 1,22 48,93 ± 1,95 33,27 ± 2,89 15,80 ± 1,38 Bảng 3.4 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết ethanol 70% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Lần 0,907 0,333 0,425 0,506 0,623 0,801 Control 2000 1500 1000 500 250 250,00 187,50 125,00 62,50 31,25 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) OD (λ = 515 nm) Lần 0,869 0,345 0,438 0,577 0,701 0,888 Lần 0,977 0,317 0,485 0,570 0,754 0,798 Trung bình ± SEM 63,86 ± 0,88 51,04 ± 1,98 39,96 ± 2,46 24,52 ± 4,14 9,66 ± 3,22 Phụ lục Hoạt tính ức chế peroxy hóa tế bào cao chiết tổng Bảng 4.1 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của Trolox Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 2000 1500 1000 500 250 100,0 75,0 50,0 25,0 12,5 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM OD (λ = 532 nm) Lần 0,421 0,124 0,145 0,168 0,223 0,268 Lần 0,413 0,119 0,140 0,171 0,211 0,261 Lần 0,418 0,122 0,142 0,175 0,231 0,260 70,85 ± 0,34 65,89 ± 0,35 58,95 ± 0,48 46,88 ± 1,39 36,98 ± 0,26 Bảng 4.2 Giá trị mật độ quang của cao chiết tổng từ Sa kê nồng độ ban đầu 2000 µg/ml thử nghiệm hoạt tính ức chế peroxy lipid hóa tế bào Mẫu Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control Cao chiết ethanol Cao chiết ethanol 45% Cao chiết ethanol 70% Cao chiết nước 96 % 2000 2000 2000 2000 100 100 100 100 OD (λ = 532 nm) Lần 0,466 0,183 0,205 0,296 0,227 Lần 0,433 0,200 0,211 0,312 0,230 Lần 0,445 0,188 0,198 0,325 0,245 Bảng 4.3 Hoạt tính ức chế peroxy lipid hóa tế bào của cao chiết ethanol 45% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 2000 1500 1000 500 250 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100,0 75,0 50,0 25,0 12,5 OD (λ = 532 nm) Lần 0,466 0,183 0,232 0,306 0,381 0,423 Lần Lần 0,433 0,445 0,200 0,188 0,229 0,231 0,303 0,311 0,381 0,379 0,433 0,425 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM 57,51 ± 1,13 48,51 ± 0,19 31,55 ± 0,52 15,10 ± 0,14 4,69 ± 0,68 Bảng 4.4 Hoạt tính ức chế peroxy lipid hóa tế bào của cao chiết ethanol 70% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 2000 1500 1000 500 250 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100,0 75,0 50,0 25,0 12,5 OD (λ = 532 nm) Lần 0,466 0,205 0,240 0,321 0,397 0,425 Lần 0,433 0,211 0,249 0,345 0,390 0,439 Lần 0,445 0,198 0,238 0,298 0,401 0,435 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM 54,32 ± 0,83 45,91 ± 0,75 28,27 ± 3,03 11,61 ± 0,72 3,35 ± 0,93 Phụ lục Hoạt tính ức chế xanthin oxidase cao chiết tổng Bảng 5.1 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của allopurinol Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 102,082 68,055 51,041 34,027 17,014 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 34,028 22,685 17,014 11,343 5,671 OD (λ = 293 nm) Lần 34,028 22,685 17,014 11,343 5,671 34,028 Lần 34,02 22,68 17,01 11,34 5,671 34,02 Lần 34,028 22,685 17,014 11,343 5,671 34,028 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase (%) Trung bình ± SEM 70,85 ± 0,34 60,72 ± 1,65 44,78 ± 4,34 37,61 ± 2,95 21,43 ± 1,45 Bảng 5.2 Giá trị mật độ quang của cao chiết tổng từ Sa kê nồng độ ban đầu 400 µg/ml thử nghiệm hoạt tính ức chế xanthin oxidase Nồng độ ban đầu (µg/ml) Mẫu Control Cao chiết ethanol 45% Cao chiết ethanol 70% Cao chiết ethanol 96 Cao chiết nước % Nồng độ phản ứng (µg/ml) 400 400 400 400 OD (λ = 293 nm) Lần 0,476 0,087 0,060 0,384 0,396 133,33 133,33 133,33 133,33 Lần 0,450 0,111 0,143 0,367 0,351 Lần 0,443 0,096 0,133 0,426 0,321 Bảng 5.3 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết ethanol 45% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 300 200 100 50 25 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100,00 66,67 33,33 16,67 8,33 OD (λ = 293 nm) Lần 0,541 0,145 0,177 0,303 0,371 0,476 Lần 0,535 0,128 0,205 0,300 0,426 0,497 Lần 0,542 0,127 0,211 0,301 0,315 0,488 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase (%) Trung bình ± SEM 75,28 ± 0,36 63,35 ± 0,71 44,13 ± 0,07 31,27 ± 5,94 4,26 ± 1,12 Bảng 5.4 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết ethanol 70% Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 300 200 100 50 25 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100,00 66,67 33,33 16,67 8,33 OD (λ = 293 nm) Lần 0,541 0,144 0,220 0,327 0,405 0,527 Lần 0,535 0,118 0,200 0,274 0,475 0,501 Lần 0,542 0,208 0,269 0,278 0,481 0,521 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase (%) Trung bình ± SEM 70,95 ± 4,83 57,12 ± 3,70 45,67 ± 1,07 15,88 ± 1,54 4,26 ± 1,12 Phụ lục Giá trị khối lượng làm khô cao chiết phân đoạn Bảng 6.1 Giá trị khối lượng làm khô của cao chiết phân đoạn Mẫu Cao chiết phân đoạn diethyl ether Cao chiết phân đoạn chloroform Cao chiết phân đoạn ethyl acetat Cao chiết phân đoạn n-butanol Cao chiết phân đoạn nước Giá trị khối lượng làm khô (%) Lần Lần Lần Trung bình ± SEM 11,05 11,89 12,00 11,65 ± 0,30 13,54 13,01 13,48 13,34 ± 0,17 15,26 15,45 14,98 15,23 ± 0,13 16,01 16,99 16,23 16,41 ± 0,29 18,00 17,56 17,45 17,67 ± 0,17 Phụ lục Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH cao chiết phân đoạn Bảng 7.1 Giá trị mật độ quang của cao chiết phân đoạn từ Sa kê nồng độ ban đầu 2000 µg/ml thử nghiệm hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH Nồng độ ban đầu (µg/ml) Mẫu Cao chiết phân đoạn diethyl ether Cao chiết phân đoạn chloroform Cao chiết phân đoạn ethyl acetat Cao chiết phân đoạn n-butanol Cao chiết phân đoạn nước Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 2000 2000 2000 2000 2000 250 250 250 250 250 OD (λ= 515 nm) Lần Lần Lần 0,954 0,954 0,890 0,062 0,070 0,089 0,054 0,062 0,068 0,086 0,091 0,074 0,589 0,575 0,680 0,655 0,666 0,698 Bảng 7.2 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết phân đoạn diethyl ether Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 93,75 62,50 31,25 12,50 6,25 OD (λ = 515 nm) Lần 0,902 0,065 0,095 0,220 0,525 0,714 Lần 0,982 0,071 0,087 0,203 0,547 0,741 Lần 0,977 0,072 0,077 0,199 0,490 0,805 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) Trung bình ± SEM 92,73 ± 0,23 90,95 ± 0,54 78,26 ± 0,67 45,40 ± 1,74 21,01 ± 2,82 Bảng 7.3 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết phân đoạn chloroform Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 93,75 62,50 31,25 12,50 6,25 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) OD (λ = 515 nm) Lần 0,902 0,078 0,128 0,294 0,529 0,669 Lần 0,982 0,086 0,120 0,233 0,550 0,719 Lần 0,977 0,089 0,133 0,315 0,599 0,745 Trung bình ± SEM 91,16 ± 0,34 86,68 ± 0,39 70,57 ± 2,57 41,35 ± 2,17 25,45 ± 2,33 Bảng 7.4 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH của cao chiết phân đoạn ethyl acetat Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 93,75 62,50 31,25 12,50 6,25 OD (λ = 515 nm) Lần 0,902 0,080 0,162 0,295 0,517 0,650 Lần 0,982 0,090 0,152 0,316 0,510 0,694 Hoạt tính dập tắt gốc tự DPPH (%) Lần 0,999 0,078 0,144 0,215 0,488 0,666 Trung bình ± SEM 91,40 ± 0,38 84,11 ± 0,54 71,35 ± 3,20 71,35 ± 3,20 30,28 ± 1,34 Phụ lục Hoạt tính ức chế peroxy hóa tế bào cao chiết phân đoạn Bảng 8.1 Giá trị mật độ quang của cao chiết tổng từ Sa kê nồng độ ban đầu 2000 µg/ml thử nghiệm ức chế peroxy hóa lipid tế bào Mẫu Control Cao chiết phân đoạn diethyl ether Cao chiết phân đoạn chloroform Cao chiết phân đoạn ethyl acetat Cao chiết phân đoạn n-butanol Cao chiết phân đoạn nước Nồng độ ban đầu (µg/ml) 2000 2000 2000 2000 2000 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100 100 100 100 100 OD (λ = 532 nm) Lần Lần Lần 0,426 0,419 0,445 0,016 0,014 0,014 0,017 0,016 0,016 0,030 0,028 0,026 0,262 0,283 0,254 0,220 0,267 0,235 Bảng 8.2 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của cao chiết phân đoạn diethyl ether Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 37,5 25,0 12,5 2,5 0,5 OD (λ = 532 nm) Lần 0,408 0,022 0,040 0,070 0,242 0,331 Lần 0,409 0,014 0,031 0,086 0,279 0,351 Lần 0,412 0,018 0,035 0,075 0,258 0,335 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM 95,61 ± 0,56 91,38 ± 0,63 81,20 ± 1,15 36,62 ± 2,61 17,25 ± 1,49 Bảng 8.3 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của cao chiết phân đoạn chloroform Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 37,5 25,0 12,5 2,5 0,5 OD (λ = 532 nm) Lần 0,408 0,020 0,025 0,089 0,259 0,309 Lần 0,409 0,020 0,022 0,081 0,259 0,327 Lần 0,412 0,021 0,025 0,088 0,261 0,314 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM 95,04 ± 0,08 94,14 ± 0,24 79,01 ± 0,61 36,62 ± 0,16 22,70 ± 2,33 Bảng 8.4 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào của cao chiết phân đoạn ethyl acetat Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 750 500 250 100 50 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 37,5 25,0 12,5 2,5 0,5 OD (λ = 532 nm) Lần 0,408 0,026 0,030 0,079 0,238 0,323 Lần 0,409 0,021 0,025 0,092 0,233 0,311 Lần 0,412 0,025 0,026 0,088 0,238 0,321 Hoạt tính ức chế peroxy hóa lipid tế bào (%) Trung bình ± SEM 94,14 ± 0,37 92,68 ± 0,37 78,93 ± 0,94 42,31 ± 0,41 22,29 ± 0,91 Phụ lục Hoạt tính ức chế xanthin oxidase cao chiết phân đoạn Bảng 9.1 Giá trị mật độ quang của cao chiết phân đoạn từ Sa kê nồng độ ban đầu 400 µg/ml thử nghiệm hoạt tính ức chế xanthin oxidase Nồng độ ban đầu (µg/ml) Mẫu Control Cao chiết phân đoạn diethyl Cao etherchiết phân đoạn chloroform Cao chiết phân đoạn ethyl acetat Cao chiết phân đoạn n-butanol Cao chiết phân đoạn nước 400 400 400 400 400 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 133,33 133,33 133,33 133,33 133,33 OD (λ = 293 nm) Lần 0,476 0,317 0,146 0,095 0,322 0,267 Lần Lần 0,450 0,443 0,379 0,343 0,183 0,149 0,102 0,069 0,329 0,302 0,243 0,192 Bảng 9.2 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết phân đoạn chloroform Nồng độ ban đầu (µg/ml) Nồng độ phản ứng (µg/ml) Control 300 200 100 50 25 100,00 66,66 33,33 16,66 8,33 OD (λ = 293 nm) Lần 0,541 0,231 0,259 0,364 0,503 0,537 Lần 0,535 0,230 0,250 0,324 0,456 0,492 Lần 0,542 0,205 0,293 0,312 0,490 0,523 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase (%) Trung bình ± SEM 75,15 ± 4,91 50,43 ± 2,31 38,19 ± 1,14 10,44 ± 1,92 4,07 ± 1,76 Bảng 9.3 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase của cao chiết phân đoạn ethyl acetat Nồng độ ban đầu (µg/ml) Control 300 200 100 50 25 Nồng độ phản ứng (µg/ml) 100,00 66,66 33,33 16,66 8,33 OD (λ = 293 nm) Lần 0,541 0,103 0,158 0,226 0,322 0,402 Lần 0,535 0,178 0,144 0,218 0,309 0,464 Lần 0,542 0,134 0,221 0,266 0,274 0,453 Hoạt tính ức chế xanthin oxidase (%) Trung bình ± SEM 74,35 ± 2,59 67,67 ± 4,15 56,12 ± 2,59 44,06 ± 1,91 18,48 ± 1,30 Phụ lục 10 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm theo phác đồ điều trị Bảng 10.1 Hàm lượng acid uric máu lơ thử nghiệm chuột bình thường trước thử nghiệm theo phác đồ điều trị STT Chứng sinh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,7 2,6 2,7 2,9 2,7 2,9 3,0 2,6 2,8 2,7 2,7 2,7 2,7 2,5 2,6 3,0 2,7 2,8 3,0 3,1 3,0 3,2 3,0 3,2 3,0 2,7 2,7 2,7 3,2 3,1 2,7 2,4 Bảng 10.2 Hàm lượng acid uric máu lơ thử nghiệm chuột bình thường sau thử nghiệm theo phác đồ điều trị STT Chứng sinh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,9 2,9 2,9 2,7 2,9 2,9 2,9 2,8 3,0 3,0 3,0 2,7 3,0 3,0 3,0 2,9 2,7 2,6 2,7 2,5 3,0 3,2 2,6 2,4 3,0 2,6 3,0 2,7 3,2 3,2 2,9 2,6 Bảng 10.3 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm chuột bệnh lý trước thử nghiệm theo phác đồ điều trị STT Chứng bệnh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,5 2,9 Allopurinol liều 10 mg/kg 1,9 2,9 2,8 2,7 2,9 2,9 2,9 2,6 2,9 2,7 2,7 3,1 2,8 2,7 2,9 2,8 2,9 3,0 3,0 2,8 3,2 2,6 2,6 2,9 2,9 2,8 2,9 3,0 2,5 3,0 Bảng 10.4 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm chuột bệnh lý sau thử nghiệm theo phác đồ điều trị STT Chứng bệnh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 3,4 3,3 2,7 4,0 3,9 2,9 3,2 2,6 3,9 3,0 3,0 3,4 4,0 3,2 3,1 2,5 3,9 3,1 3,3 2,7 4,1 3,1 3,1 2,8 3,7 3,4 3,1 3,2 3,8 3,4 3,1 2,9 Phụ lục 11 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm theo phác đồ dự phòng Bảng 11.1 Hàm lượng acid uric máu lơ thử nghiệm chuột bình thường trước thử nghiệm theo phác đồ dự phòng STT Chứng sinh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,7 2,6 2,7 2,9 2,9 2,9 3,0 2,6 2,9 2,7 2,7 2,7 2,7 2,5 2,6 3,0 2,7 2,8 3,0 3,0 3,0 3,2 3,0 3,1 3,0 2,7 2,7 2,6 3,2 3,1 2,7 2,4 Bảng 11.2 Hàm lượng acid uric máu lơ thử nghiệm chuột bình thường sau thử nghiệm theo phác đồ dự phòng STT Chứng sinh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,5 3,5 2,6 3,3 2,5 3,7 3,7 2,3 2,6 3,9 3,8 2,2 3,4 4,0 3,4 2,6 2,7 2,7 2,3 2,9 2,9 2,0 2,2 2,3 2,7 2,3 2,1 2,4 2,9 2,3 2,3 2,9 Bảng 11.3 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm chuột bệnh lý trước thử nghiệm theo phác đồ dự phòng STT Chứng bệnh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân Allopurinol đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 10 mg/kg liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 2,7 2,6 2,7 2,9 2,9 2,9 3,0 2,6 2,9 2,7 2,7 2,7 2,7 2,5 2,6 3,0 2,6 2,7 2,9 3,0 2,9 3,1 2,9 3,1 2,9 2,6 2,6 2,6 2,8 3,0 2,6 2,4 Bảng 11.4 Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm chuột bệnh lý sau thử nghiệm theo phác đồ dự phòng STT Chứng bệnh lý Hàm lượng acid uric máu (µg/ml) Cao chiết phân Cao chiết phân đoạn ethyl acetat đoạn ethyl acetat liều 0,17 g cao/kg liều 0,34 g cao/kg 3,5 2,1 Allopurinol liều 10 mg/kg 4,2 2,5 4,0 3,6 2,2 2,9 3,9 3,6 2,4 2,9 3,9 2,9 3,3 3,0 4,0 2,9 2,9 3,0 4,0 2,6 3,2 2,7 4,4 2,8 4,2 3,0 4,3 2,8 3,5 2,9 B- PHỤ LỤC BÀI BÁO Nguyễn Hoàng Minh, Nguyễn Thúy Hương, Nguyễn Thị Thu Hương “Tác dụng hạ acid uric máu của cao phân đoạn từ Xa kê (Artocarpus altilis),” Tạp chí Dược liệu 22 (6), pp 371 – 376, 2017 Nguyễn Hoàng Minh, Nguyễn Thúy Hương, Nguyễn Thị Thu Hương “Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan theo hướng chống oxy hóa của cao phân đoạn từ Xa kê (Artocarpus altilis),” Y học TP.Hồ Chí Minh 21(6) pp 138 – 144, 2017 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG THƠNG TIN CÁ NHÂN -Họ tên: Nguyễn Hoàng Minh -Ngày, tháng, năm sinh: 20/02/1990 Nơi sinh: Sa Đéc- Đồng Tháp -Địa liên lạc: 130/3 Tô Hiến Thành, Phường 15, Quận 10, TP Hồ Chí Minh Q TRÌNH ĐÀO TẠO -2008 –> 2012: Theo học Trường Đại học Khoa học tự nhiên Tp HCM, ngành Sinh học -2016 –> 2018: Theo học trường Đại học Bách Khoa Tp HCM, chương trình cao học chun ngành Cơng nghệ sinh học Q TRÌNH CƠNG TÁC -2012 –> nay: Nghiên cứu viên- Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM ... đồ điều trị dự phòng [15] Kế thừa nghiên cứu trên, luận văn tiếp tục tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa cao chiết phân đoạn từ Sa kê (Artocarpus altilis) theo hướng hỗ trợ điều. .. áp thu cao chiết phân đoạn tương ứng: cao chiết phân đoạn diethyl ether, cao chiết phân đoạn chloroform, cao chiết phân đoạn ethyl acetat, cao chiết phân đoạn n-butanol cao chiết phân đoạn nước... ĐOẠN TỪ LÁ SA KÊ (ARTOCARPUS ALTILIS) ĐỊNH HƯỚNG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ BỆNH GOUT Theo kinh nghiệm dân gian, Sa kê (Artocarpus altilis (Park.) Fosb.) sử dụng thuốc điều trị bệnh gout Lá Sa kê chứa nhiều