Để đánh giá sự biểu hiện của collagen, mRNA phiên mã cho procollagen α1(I)
được kiểm tra. RNA được tách từ gan của các con chuột ở nhóm đối chứng và
nhóm CCl4 liều 0,8 ml/kg đem khuyếch đại bằng RT-PCR (reverse transcription PCR). Sản phẩm khuyếch đại của GAPDH được đánh giá đi kèm để làm đối chứng nội cho phản ứng RT-PCR. Kết quả chạy điện di được quan sát dưới bước sóng 254 nm. Ở nhóm đối chứng không thấy xuất hiện vạch 419 bp tức là vạch biểu thị sản phẩm khuyếch đại procollagen α1(I), nhưng sản phẩm khuyếch đại RT-PCR procollagen α1(I) của nhóm chuộtbị xử lý với CCl4 liều 0,8 ml/kg xuất hiện rất rõ
Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận ở cả hai nhóm đối chứng, nhóm CCl4 liều 0,8 ml/ kg, như vậyviệc khuyếch đại sản phẩm được thực hiện thành công trong phản ứng RT-PCR với chu trình luân nhiệt đã thiết lập như trên (mục 2.2.2.3).
Hình 3.12. Kết quả điện di trên gel agarose sản phẩm khuếch đại RT-PCR procollagen α1(I), GAPDH.
Giếng 1L: thang chuẩn 100-1000bp, giếng 2P: procollagen α1(I) ở chuột nhóm đối chứng, giếng
3P: procollagen α1(I) ở chuột nhóm CCl4 0,8 ml/kg, giếng 4G: GAPDH ở chuột nhóm đối chứng,
giếng 5G: GAPDH ở chuột nhóm CCl4 0,8 ml/kg.
Xơ hóa gan liên quan đến những thay đổi chủ yếu về cả lượng lẫn thành phần
ECM (Benyon và Iredale, 2000). Sự tích tụ ECM là kết quả của cả sự tăng tổng hợp
lẫn sự giảm thóai biến chất nền (Arthur M.J, 2000). Tế bào hình sao là các tế bào sản xuất ECM chủ yếu trong mô gan tổn thương (Gabele và cộng sự, 2003). Theo Milani và cộng sự (1990), Marra (1999), Francis J. Eng và cộng sự (2000), Gabele và cộng sự (2003), Xiao-wei Huang và cộng sự (2010), sự hoạt hóa là sự cần thiết yếu trong sinh tạo sợi xơ hóa gan, do tế bào hình sao chuyển đổi thành tế bào giống nguyên bào sợi cơ sản xuất ra lượng lớn protein chất nền (collagen, fibronectin, laminin, and proteoglycans) trong gan tổn thương.
Theo Du Wei Dong và cộng sự (1999); sự tăng tổng hợp procollagen góp phần vào tăng lượng collagen trong gan xơ hóa, sự biểu hiện mRNA procollagen α1(I) phản ánh mức độ xơ hóa gan. Theo Kinnman và Housset (2002), Magness và cộng
sự (2004); việc xử lý chuột với hóa chất CCl4 liều 0,8 ml/kg đã tạo ra những gốc tự do thúc đẩy hàng loạt quá trình phát sinh xơ hóa.
So sánh kết quả thu được trong đề tài với kết quả của tác giả M.T Abdel Aziz
Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận Abdel Aziz và cộng sự (2007), kết quả điện di trên gel agarose sản phẩm khuyếch đại collagen từ phản ứng PCR collagen (thể hiện cụ thể vạch 330 bp xuất hiện sáng và rõ hơn) ở chuột rat 6 tuần tuổi được tiêm dưới da CCl4 2 ml/kg 2 lần/ tuần trong
6 tuần cho thấy mức collagen được tổng hợp tăng cao so với chuột thuộc nhóm đối chứng (tiêm dưới da dầu hải ly-castor) (hình 3.13).
Hình 3.13. Kết quả điện di trên gel agarose sản phẩm khuếch đại PCR collagen trong nghiên cứu của M.T Abdel Aziz và cộng sự (2007).
Chuột rat 6 tuần tuổi được tiêm dưới da dầu hải ly-castor (chuột đối chứng) (giếng 2), CCl4 2 ml/kg (CCl4 được pha trong dầu hải ly theo tỉ lệ 1: 25) (giếng 3) 2 lần/ tuần trong 6 tuần.