Sự biểu hiện gen mã hóa cho intergrin ở mức phiên mã

Trong suốt quá trình xơ hóa, có sự tăng sinh của nguyên bào sợi và tăng tổng

hợp chất nền ngoại bào. Integrin 8được biểu hiện trong tế bào trung mô, nguyên bào sợi cơ ở phổi, tế bào truyền tin ở thận và tế bào hình sao ở gan, tế bào

cơ trơn. Tế bào trung mô biểu hiện integrin 81 truyền tín hiệu cho sự phát triển xơ hóa. Sự biểu hiện integrin 81 được điều hòa tăng mức sau khi tổn thương ở

thận, phổi, gan và cơ tim (Eduardo Farias và cộng sự, 2005). Do đó, sự biểu hiện

các tế bào phát sinh xơ hóa được đánh giá ở gan chuột bị xử lý CCl4 0,8 ml/ kg

thông qua sự biểu hiện gen mã hóa cho integrin  ở mức phiên mã.

Phản ứng RT-PCR được tiến hành nhằm khuyếch đại sự biểu hiện integrin Sựkhuyếch đại gen mã cho GAPDH luôn tiến hành song song để làm đối chứng nội cho phản ứng RT-PCR. Kết quả tiến hành phản ứng được đánh giá là thành công do có sự xuất hiện vạch sản phẩm khuyếch đại của GAPDH. Kết quả điện di trên gel agarose sản phẩm intergrin thu được như saucả hai vạch 226bp đều xuất

Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận hiện ở chuột nhóm đối chứng và chuột nhóm CCl4 0,8 ml/kg. Tuy nhiên, trong

nhóm chuột được cho uống CCl4 0,8 ml/kg vạch 226 xuất hiện mạnh hơn, vạch sáng và rõ hơn (hình 3.14). Kết quả này cho phép rút ra nhận xét rằng chuột uống CCl4 0,8 ml/kg tăng biểu hiện intergrin  là thụ thể tế bào sinh xơ hóa.

Hình 3.14. Kết quả điện di trên gel agarose sản phẩm khuyếch đại RT-PCR integrin GAPDH.

Giếng 1L: thang chuẩn 100-1000bp, giếng 2F: integrin ở chuột nhóm đối chứng, giếng 3F: integrin ở chuột nhóm CCl4 0,8 ml/kg, giếng 4G: GAPDH ở chuột nhóm đối chứng, giếng 5G:

GAPDH ở chuột nhóm CCl4 0,8 ml/kg.

Theo Eduardo Farias và cộng sự (2005), fibronectin, và những thành phần

khác trong chất nền tạo nên bộ khung cho nguyên bào sợi di cư. Fibronectin cũng

cung cấp sự hướng hóa và tín hiệutăng sinh cho nguyên bào sợi. Sự tăng sinh và di

cư của nguyên bào sợi đến mô tổn thương là một đáp ứng tổn thương tự phục hồi

bình thường của cơ thể. Tuy nhiên, tại thời điểm mà quá trình phục hồi bình thường

thất bại, kết quả dẫn đến là xơ hóa kéo dài. Có nhiều bằng chứng cho thấy quá trình apoptosis của nguyên bào sợi bị ngăn chặn hay ức chế góp phần xơ hóa kéo dài. Do integrin 81 và cơ chất của nó là fibronectin, tác động đến sự sống tế bào, thông qua nhiều con đường tín hiệu, chủ yếu là PI3 kinase. Sự sống sót của nguyên bào sợi cơ biểu hiện 81 có lẽ góp phần xơ hóa kéo dài sau tổn thương.

So sánh kết quảthu được với kết quả Western blot về sự biểu hiện -Smooth muscle actin (-SMA) trong nghiên cứu của Cheuk-Kwan Sun và cộng sự (2010) là

phù hợp. -SMA là thụ thể đặc trưng cho tế bào hình sao gan đã hoạt hóa (tế bào hình sao là tế bào chủ yếu biểu hiện integrin  trong gan) biểu hiện mạnh ở chuột bị

Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận xử lý với CCl4 1ml/kg tăng cao so với nhóm đối chứng không bị tổn thương gan

(hình 3.15).

Hình 3.15. Kết quả Western blot về sự biểu hiện -Smooth muscle actin (-SMA) trong nghiên cứu của Cheuk-Kwan Sun và cộng sự (2010).

Giếng 1: chuột rat đối chứng (gan bình thường), giếng 2: chuột rat tiêm dưới da CCl4 1ml/kg (CCl4 được pha trong ôliu theo tỉ lệ 1: 1) 3 ngày/ lần trong 4 tuần.

Như vậy qua kết quả phân tích trên cho thấy sự tăng biểu hiện tế bào (intergrin) tăng sản xuất chất nền (collagen) ở gan chuột bị xử lý với CCl4 liều

0,8 ml/kg để đáp ứng làm lành tổn thương do CCl4 gây ra và dẫn đến xơ hóa gan

(hình thành những dãy sẹo sợi được thể hiện trong kết quả mô học nhuộm

hematoxylin và eosin).