Các MSC ứng viên ở thế hệ nuôi cấy thứ 2-4 đượcđánh giá sự biểu hiện các
marker bề mặt bằng Flow cytomtery. Kết quả cho thấy, các MSC ứng viên âm tính với CD34, CD45, c-Kit (CD117) trong khi đó dương tính với CD44, Sca-1 (Ly 6AE) và Thy 1 (CD90).
Bảng 3.2. Kết quả đánh giá marker bề mặt của MSC ứng viên
Maker c-kit CD34 CD45 CD90 CD44 Sca-1
Âm tính 96,10% 97,63% 97,71% 0,03% 0,05% 0,08%
Dương tính 3,93% 2,39% 2,33% 99,7% 99,95% 99,02%
Các khía cạnh về marker bề mặt của MSC từ tủy xương vẫn là vấn đề chưa rõ ràng. Nhiều nhà khoa học đã tranh cãi với nhau về việc sử dụng một profile kháng
nguyên bề mặt trong việc mô tả MSC từ tủy xương chuột (Sun và cộng sự, 2003; Peister và cộng sự, 2004; Baddoo và cộng sự, 2003).
Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận
Hình 3.24. Kết quả phân tích Flow cytometry của MSC ứng viên.
Trong phạm vi nghiên cứu của đề tài này, các MSC biểu hiện CD44, Thy 1 và Sca-1, kết quả này phù hợp với kết quả của Nadri, S. và cộng sự (2007); Masoud Soleimani và Samad Nadri (2009). Marker CD44 biểu hiện trên các tế bào bạch cầu,
Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận
nguyên cho tế bào nội mô và các tế bào lympho T (Baldwin HS, 1994). Thy 1 biểu
hiện cao ở các MSC và được xem như là một marker của MSC. Sca-1 được xem như là một marker tế bào tạo máu (Peister và cộng sự, 2003). Sự biểu hiện của Sca- 1 trong MSC từ chuột được báo cáo bởi Peister và cộng sự (2003), Baddo và cộng
sự (2003) và Sun S. và cộng sự (2003).
Kết quả đánh giá Sca-1 trên MSC thu nhận từ nghiên cứu của chúng tôi cho tỷ
lệ tế bào dương tính Sca-1 là 99, 02% cao hơn nhóm tác giả Nadri, S. và cộng sự
(2007). Nhóm nghiên cứu của Nadri phân tích các marker của MSC ở thế hệ thứ
nhất cho thấy tỷ lệ tế bào dương tính Sca-1 là 55%, trong nghiên cứu của chúng tôi,
các MSC từ thế hệ thứ 2-4 cho tỷ lệ dương tính với Sca-1 và Thy-1 cao hơn, chứng
tỏ các tế bào tương đối đồng nhất, không còn tạp nhiễm dòng tế bào tạo máu
(CD34, CD45 và c-kit đều âm tính). Tuy nhiên, kết quả cho thấy các MSC cũng
biểu hiện các kháng nguyên quyết định cho sự tạo máu và dòng tế bào nội mô.
3.6.Kết quả biệt hóa của tế bào gốc trung mô ứng viên thành tế bào xương và
mỡ
3.6.1.Kết quả biệt hóa của MSC ứng viên thành tế bào xương
Việc biệt hóa tế bào gốc trung mô là một trong những thử nghiệm được sử
dụng để chứng minh tế bào gốc trung mô. Sau khoảng 21 ngày, xét về hình dạng,
các tế bào chuyển từ dạng hình thoi dài sang dạng tròn và dạng giống như hạt đậu.
Hình thoi dài chính là hình dạng của các tế bào gốc trung mô (MSC), còn dạng tròn hoặc hạt đậu là hình dạng của tế bào xương, nên bước đầu có thể đánh giá là tế bào gốc trung mô (MSC) đã biệt hóa thành các tế bào tạo xương.
Khi nhuộm với Alizarin red, các tế bào có dạng tròn và hạt đậu bắt màu thuốc (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
nhuộm, tạo ra phức hợp màu cam. Điều này chứng tỏ rằng các tế bào gốc trung mô (MSC) đã có sự lắng tụ muối calci trong chất nền ngoại bào, nói cách khác các tế
Trần Hồng Diễm Kết quả – Biện luận
x200
Hình 3.25. Kết quả nhuộm Alizarin red.
(a)Tế bào lô đối chứng không bắt màu với Alizarin Red, chứng tỏ không biệt hóa thành xương; (b)
Tế bào lô thí nghiệm bắt màu với thuốc nhuộm, chứng tỏ tế bào đã biệt hóa thành xương.