Chương 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Mục tiêu 1 và 2: Mô tả đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng bệnh do
2.1.5. Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
- Kỹ thuật hỏi bệnh, khám lâm sàng, ghi chép và sao bệnh án gốc dựa trên các thông tin điền vào bệnh án nghiên cứu theo mẫu soạn sẵn (phụ lục 3). - Các bác sĩ và xét nghiệm viên tham gia nghiên cứu được tập huấn thực hành lâm sàng tốt trước khi tiến hành nghiên cứu.
- Lấy máu bệnh nhân:
+ Lấy 1 ống máu đông 3ml để làm huyết thanh chẩn đoán miễn dịch ELISA và xét nghiệm chức năng gan.
+ Lấy 1 ống máu không đông 2ml để làm công thức máu. - Kỹ thuật miễn dịch ELISA:
Chẩn đốn ký sinh trùng qua xét nghiệm huyết thanh tìm kháng thể IgG kháng Gnathostoma spp bằng kỹ thuật ELISA với bộ sinh phẩm chẩn đốn của Cơng ty TNHH sản xuất thương mại hóa chất Việt Sinh, được cấp phép lưu hành số 73/2016/BYT-TBCT tại Việt Nam với Mã hiệu KST5-GnathoELISA, số lô 180416, ngày sản xuất 18/04/2016, hạn sử dụng 18/04/2019 tiêu chuẩn công bố VS/TCCS05: là bộ kít dùng kháng nguyên tiết của ấu trùng G spinigerum gắn với kháng thể có trong huyết thanh người.
+ Phản ứng ELISA được thực hiện bán tự động với máy Human HumaReader HSSH gồm hai thành phần HumaReader HS là máy đọc ELISA 96 giếng hoàn toàn tự động, tự động đọc và tính tốn, Combiwash là máy rửa và ủ ELISA 96 giếng hoàn toàn tự động.
o Dụng cụ:
+ Kim, ống chích vơ trùng, ống nghiệm 5ml: dùng để lấy máu.
+ Ống nghiệm có nút đậy 180 mm x 18 mm, máy ly tâm tốc độ 10.000 vòng/ phút.
+ Micropipette loại 0 – 20 µl, 0 – 200 µl, 0 – 1000 µl: dùng trong kỹ thuật ELISA.
+ Giá để ống nghiệm
+ Dàn máy ELISA Human HumaReader HSSH gồm có máy rửa Combiwash và ủ tự động và máy đọc ELISA hồn tồn tự động.
Qui trình làm phản ứng ELISA ( làm theo hướng dẫn của bộ kit):
Pha loãng huyết thanh bệnh nhân, chứng âm, chứng dương theo tỷ lệ 1/400 µl với dung dịch pha lỗng có sẵn.
Nhỏ 100 µl huyết thanh, chứng âm, chứng dương vào các giếng kháng nguyên.
Ủ tự động ở nhiệt độ 370C trong 1 giờ.
Rửa bằng máy tự động.
Gắn cộng hợp 100 µl vào mỗi giếng.
Ủ tự động ở nhiệt độ 370C trong 1 giờ.
Rửa bằng máy tự động.
Phủ cơ chất TMB (Tetrametyl - benzidin)
Ủ tự động ở nhiệt độ 370C trong 30 phút.
Đo bằng máy ELISA Human HumaReader HSSH.
Thông tin về bộ sinh phẩm KST5-GnathoELISA do nhà sản xuất cung cấp: Độ nhạy 96,7% và độ đặc hiệu là 99,1%, Khơng có báo cáo cơng bố về phản ứng chéo với một bệnh ký sinh trùng khác.
Kết quả nhận định dựa vào mật độ quang (OD) và được tính tốn thơng qua chỉ số là tỷ số giữa OD của mẫu thử (S: sample) với OD của ngưỡng (CO: cut off). Theo cơng bố của nhà sản xuất CO trong kít bằng 0,5, kết quả dương tính khi S/CO ≥ 1,0, âm tính khi S/CO <1,0.
Kê đơn và giải thích bệnh nhân tuân thủ phác đồ điều trị và hẹn tái khám sau 2 tháng và 6 tháng.
Hướng dẫn bệnh nhân uống thuốc ivermectin với một ly nước đầy (240ml) trước hoặc sau ăn 2 giờ, bệnh nhân được cân nặng. Thuốc được tính theo trọng lượng bệnh nhân tại thời điểm uống thuốc, liều duy nhất 0,2 mg/kg. Bệnh nhân được uống thuốc tại chỗ trước sự chứng kiến của Bác sĩ điều trị.
Theo dõi tác dụng không mong muốn: bệnh nhân sau khi uống thuốc được lưu lại phịng khám 4 giờ (vì thời gian đạt tới nồng độ đỉnh trong huyết tương là 4 giờ). Sau đó dặn bệnh nhân trong 2 ngày (48 giờ) có bất kỳ dấu hiệu bất thường nào khác như chóng mặt, nhức đầu, đau bụng, buồn nơn, tiêu chảy, đau cơ, sốt, ngứa, ban đỏ trên da phải gọi điện thoại cho Bác sĩ ngay.