Ch-ơng 2: đối t-ợng và ph-ơng pháp nghiên cứu
2.1.1. Quy trình sàng lọc và thu nhận mảnh ghép
Đối t-ợng nghiên cứu trực tiếp là các mảnh ghép gân Achille đồng loại đ-ợc xử lý và bảo quản lạnh sâu theo quy trình tại Labô Bảo quản mô phôi, tr-ờng Đại Học Y Hà Nội.
2.1.1.1. Quy trình sàng lọc và thu nhận mảnh ghép [6],[32],[129],[188]
Quy trình đ-ợc xây dựng tại Labô Bảo quản Mô Phôi thai, tr-ờng Đại Học Y Hà Nội dựa trên cơ sở quy trình của Hiệp Hội Ngân Hàng Mô Châu á Thái Bình D-ơng để thu nhận các mảnh ghép gân đồng loại từ các chi thể cắt cụt trong cấp cứu.
* Tiêu chuẩn lấy mảnh ghép:
+ Bệnh nhân và ng-ời nhà đồng thuận cho thu nhận mảnh ghép.
+ Mảnh ghép đ-ợc lấy từ bệnh nhân khỏe mạnh, tuổi d-ới 40, không mắc bệnh mạn tính.
+ Các xét nghiệm sàng lọc HIV, HbsAg, HCV.
+ Mảnh ghép không dập nát, đảm bảo sự nguyên vẹn về mặt giải phẫu. + Mảnh ghép đ-ợc lấy từ chi thể cắt rời khỏi cơ thể d-ới 10 tiếng.
* Thu nhận, xử lý và bảo quản mảnh ghép
+ Thu nhận mảnh ghép từ phần chi thể cắt cụt đủ điều kiện nh- trên. Mảnh ghép đã thu nhận đ-ợc đựng trong túi vô trùng 2 lớp.
+ Vận chuyển nhanh về labô xử lý mô bằng thùng bảo quản chuyên dụng trong vòng 24h, trong tr-ờng hợp chậm hơn thì bảo quản mô đã lấy ở nhiệt độ từ 0oC đến âm 8oC (ngăn đá tủ lạnh).
+ Lấy bệnh phẩm cấy vi khuẩn bằng tăm bông: Dùng 2 tăm bông vô trùng (tăm bông 1 và 2) để lấy bệnh phẩm tr-ớc khi xử lý. Tăm bông 1 sẽ đ-ợc cấy lên môi tr-ờng thạch máu ở ba vùng, vùng nguyên thủy và các vùng thứ phát, theo dõi trong vòng 7 ngày và đọc kết quả bởi cán bộ của labô (đã đ-ợc đào tạo về vi sinh vật). Tăm bông 2 đ-ợc bảo quản trong điều kiện vô trùng ở độ lạnh sâu cùng với mô đ-ợc xử lý để đem đi chiếu xạ.
+ Cắt lọc xử lý mảnh ghép: lấy bỏ hết các thành phần mô liên kết nh- cơ, cân, mạc,.. chỉ để lại nút x-ơng và gân trong môi tr-ờng n-ớc ấm (để tan hết mỡ).
+ Ngâm mảnh ghép đã xử lý trong dung dịch kháng sinh trong vòng 1h (là dung dịch hỗn hợp của Gentamycin và Streptomycin với nồng độ đ-ợc pha là 100 ml n-ớc muối sinh lý thì pha 1g Streptomycin và 160mg Gentamycin).
+ Rửa lại mảnh ghép bằng n-ớc muối sinh lý lạnh vô trùng để làm sạch dung dịch kháng sinh. Đối với mô x-ơng, rửa bằng máy siêu âm.
+ Đóng gói mảnh ghép trong túi vô trùng 3 lớp (1 lớp túi vải, 2 lớp túi nilon trong đó lớp nilon đảm bảo không bị biến tính và thải độc d-ới tác động của tia Gamma) và bảo quản ở độ lạnh sâu âm 85oC.
+ Chiếu xạ túi đựng mảnh ghép cùng với tăm bông 2 với liều 25kGy, trong quá trình chiếu xạ, mô vẫn đ-ợc đảm bảo ở nhiệt độ lạnh sâu âm 75oC bằng đá CO2.
+ Cấy vi khuẩn lần 2 bằng tăm bông 2. Quy trình cấy nh- lần 1 nh-ng ng-ời đọc là bác sỹ chuyên khoa Vi khuẩn học. Nếu âm tính, mô sẽ đ-ợc bảo quản ở độ lạnh sâu âm 85oC để chờ ghép lại.
Hình 2.1: Mảnh ghép đ-ợc đựng trong túi bảo quản 3 lớp, bảo quản ở độ lạnh sâu để chuẩn bị cho ghép
* Rã đông mảnh ghép và sử dụng cho phẫu thuật
+ Các mảnh ghép đ-ợc sử dụng cho phẫu thuật phải đảm bảo cấy vi khuẩn âm tính cả hai lần.
+ Khi có nhu cầu sử dụng mảnh ghép cho phẫu thuật, mảnh ghép đ-ợc rã đông từ nhiệt độ âm 85oC về nhiệt độ 0oC – 4oC. Việc rã đông đ-ợc thực hiện qua hai b-ớc :
- B-ớc 1 : Từ âm 85oC về âm 25oC trong thời gian khoảng 12 giờ - B-ớc 2 : Từ âm 25oC về 0oC trong thời gian khoảng 6 giờ
+ Sau đó, mảnh ghép sẽ đ-ợc chuyển từ Labô bảo quản về phòng mổ bằng bình vận chuyển mô chuyên dụng, đảm bảo nhiệt độ trong bình luôn là 0oC – 4oC. Sau đó, mảnh ghép sẽ đ-ợc đ-a ra khỏi bình vận chuyển trong điều kiện nhiệt độ phòng mổ khoảng 25oC.
Hình 2.2: Bình bảo quản mô chuyên dụng, sử dụng để vận chuyển mảnh ghép từ nơi thu nhận về Labô và ng-ợc lại, từ Labô về phòng mổ
+ Mảnh ghép sẽ đ-ợc lấy ra khỏi túi bảo quản và xử lý theo kích th-ớc đã định để thực hiện ghép vào cho bệnh nhân.
2.1.1.2. Đánh giá các thông tin về quy trình
+ Kích th-ớc mảnh ghép đ-ợc thu nhận: đ-ờng kính, chiều dài, kích th-ớc nút x-ơng
+ Thời gian thu nhận mảnh ghép tính từ khi cắt cụt chi
+ Thời gian từ khi thu nhận mảnh ghép đến khi chuyển về Labô bảo quản + Thời gian bảo quản mảnh ghép cho đến khi đ-ợc sử dụng cho bệnh nhân
+ Thời gian rã đông mảnh ghép, tức là thời gian đ-a mảnh ghép từ nhiệt độ âm 85oC về nhiệt độ 0oC – 4oC để chuẩn bị ghép cho bệnh nhân
+ Thời gian từ khi mảnh ghép đ-ợc rã đông đến khi mảnh ghép đ-ợc ghép vào cơ thể bệnh nhân.
+ Kích th-ớc mảnh ghép đ-ợc sử dụng trong phẫu thuật