Trong phát triển xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn, một số chỉ tiêu đánh giá cần quan tâm đó là độ đặc hiệu, độ nhạy, độ ổn định và thời gian xét nghiệm:
Độ đặc hiệu của xét nghiệm ELISA có thể bị ảnh hưởng bởi phản ứng chéo xuất hiện giữa kháng nguyên nọc rắn này với kháng thể bắt giữ đặc hiệu loài rắn khác. Phản ứng chéo thường xảy ra nếu kháng thể dùng cho mục đích chẩn đoán là kháng thể đa clôn chống lại nọc độc tổng số. Do vậy, tinh sạch kháng thể đặc hiệu loài là bước đầu tiên quan trọng nhất trong việc phát triển xét nghiệm ELISA [106]. Trong việc điều trị bệnh nhân bị nhiễm độc do rắn cắn thì độ đặc hiệu của xét nghiệm ELISA rất quan trọng. Dựa vào kết quả xét nghiệm ELISA có thể định hướng chẩn đoán loài rắn độc cắn và chỉ định sử dụng huyết thanh kháng nọc rắn đặc hiệu sớm hơn cho bệnh nhân.
Độ nhạy của xét nghiệm ELISA phụ thuộc vào thiết kế xét nghiệm ELISA, người ta có thể làm tăng độ nhạy của xét nghiệm ELISA thông qua hệ thống khuếch đại avidin – biotin. Bằng phương pháp này Selvanayagam và CS (1999) có thể phát hiện nọc độc của bốn loài rắn độc ở Ấn Độ ở mức 100 pg/ml trong các mô của nạn nhân tử vong do các loài rắn này cắn [44]. Kulawickrama và cộng sự (2010) có thể phát hiện nọc rắn độc ở nồng độ 0,15 ng/ml trong huyết thanh bệnh nhân bị cắn bởi loài rắn taipan Australia bằng xét nghiệm AB – ELISA [75]. Độ nhạy của xét nghiệm ELISA có thể tăng lên khi sử dụng cộng hợp kháng thể phát hiện gắn enzyme AbE-ELISA (3 kháng thể). Bằng phương pháp này Hung Dong - Zong và cộng sự (2003) có thể phát hiện nọc rắn hổ trong 31 mẫu huyết thanh của 27 nạn nhân bị rắn hổ Đài Loan cắn với độ nhạy phát hiện nọc độc ở mức 1 ng/ml [56].
Độ ổn định của xét nghiệm ELISA có ý nghĩa rất quan trọng trong việc ứng dụng bộ xét nghiệm và thương mại hóa sản phẩm. Độ ổn định của bộ sinh phẩm phát hiện nọc rắn độc tối thiểu phải đạt trên 3 tháng thì mới có khả năng ứng dụng trong thực tế và thương mại hóa sản phẩm.
Thời gian xét nghiệm đóng vai trò quan trọng trong việc ứng dụng bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc trên lâm sàng. Các xét nghiệm ELISA thường có thời gian tiến hành khoảng 90 - 120 phút. Sử dụng kháng thể có ái lực và độ đặc hiệu cao góp phần rút ngắn thời gian xét nghiệm ELISA. Thời gian cho xét nghiệm phát hiện nọc rắn được nhiều tác giả cho là hợp lý nếu dao động trong khoảng 30 - 45 phút kể từ khi tra mẫu xét nghiệm [45], [82]. Đối với những bệnh nhân bị các loài rắn lục cắn thì vấn đề thời gian xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc có thể lên đến hàng giờ vẫn có thể chấp nhận được. Tuy nhiên, những bệnh nhân bị cắn bởi các loài rắn hổ thì thời gian xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc lại yêu cầu nhanh nhất có thể.