KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2.2.Điều kiện tối ưu của phản ứng AbE-ELISA
Các điều kiện cho phản ứng AbE-ELISA được khảo sát cho kết quả tối ưu thu được như sau:
- Kháng thể ngựa gắn lên giếng xét nghiệm.
Bảng 3.2. Kết quả tối ưu hóa kháng thể ngựa gắn lên giếng xét nghiệm
Giá trị OD (450nm) Nồng độ kháng thể ngựa gắn bản p
2,5 (µg/ml) 5,0 (µg/ml)
X ± SD 0,14 ± 0,014 0,18 ± 0,015 0,0002
Nhận xét:Kết quả bảng 3.2 cho thấy ở cùng điều kiện phản ứng AbE-ELISA, sử dụng kháng thể ngựa gắn bản ở nồng độ 5,0 µg/ml thì phản ứng ELISA có giá trị OD đo được cao hơn so với sử dụng kháng thể ngựa gắn bản ở nồng độ 2,5 µg/ml . Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p = 0,0002.
- Kháng thể IgG thỏ đặc hiệu loài rắn lục xanh và hổ đất.
Bảng 3.3. Kết quả tối ưu kháng thể IgG thỏ đặc hiệu loài rắn lục xanh và hổ đất
Giá trị OD (450nm) Kháng thể IgG thỏ đặc hiệu loài rắn p
1 (µg/ml) 2 (µg/ml)
X ± SD 0,16 ± 0,019 0,26 ± 0,038 0,0003
Nhận xét:
Kết quả bảng 3.3 cho thấy ở cùng điều kiện phản ứng ELISA, sử dụng kháng thể phát hiện (kháng thể IgG thỏ đặc hiệu loài rắn) ở nồng độ 2,0µg/ml thì phản ứng ELISA có giá trị OD đo được cao hơn so với sử dụng kháng thể phát hiện ở nồng độ 1µg/ml. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p = 0,0003.
- Cộng hợp HRP- kháng thể chuột kháng IgG thỏ (antirabbit IgG – HRP).
Bảng 3.4. Kết quả tối ưu cộng hợp HRP-kháng thể kháng IgG thỏ
Giá trị OD (450nm) Cộng hợp HRP-kháng thể pha loãng p
1/10.000 1/20.000
X ± SD 0,21 ± 0,012 0,15 ± 0,02 0,016
Nhận xét:
Kết quả bảng 3.4 cho thấy trong cùng điều kiện phản ứng, sử dụng cộng hợp HRP-kháng thể chuột kháng IgG thỏ pha loãng 1/10.000 cho phản ứng màu rõ nét hơn (giá trị OD đo được cao hơn) so với sử dụng độ pha loãng 1/20.000 theo khuyến cáo của nhà sản xuất. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p = 0,016.
- Thời gian ủ cơ chất màu.
Bảng 3.5. Kết quả tối ưu thời gian ủ cơ chất màu Giá trị OD (450nm)
Chứng âm
Thời gian ủ cơ chất màu p
5 phút 10 phút
X ± SD 0,083 ± 0,001 0,11 ± 0,03 < 0,001
Nhận xét:
Kết quả bảng 3.5 cho thấy trong cùng điều kiện phản ứng ELISA, sử dụng thời gian ủ cơ chất màu 10 phút sẽ làm cho giá trị nền (giá trị OD chứng âm) của phản ứng ELISA lớn hơn 0,1 và cao hơn giá trị nền khi ủ cơ chất màu 5 phút. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,001.