Mặc dù có nhiều phương pháp phát hiện nọc rắn độc được mô tả, nhưng chỉ có hai bộ xét nghiệm chẩn đoán rắn độc cắn được phát triển. Bộ xét nghiệm thứ nhất do phòng thí nghiệm huyết thanh Commonwealth - Úc chế tạo. Phiên bản đầu tiên của bộ xét nghiệm này sử dụng phương pháp miễn dịch enzyme đã được phát triển năm 1979. Howard Chadler và Hurrell (1982) đã giới thiệu một phiên bản miễn dịch enzyme phản ứng trong ống mao quản bằng thủy tinh. Bộ xét nghiệm này phù hợp để sử dụng nhưng quá đắt và không tiện lợi nên khó sản xuất hàng loạt [53]. Năm 1991 bộ mao quản bằng thuỷ tinh đã được thay thế bằng các giếng nhựa polystyrene với 8 giếng cho 1 xét nghiệm bao gồm 1 giếng trống (blank), một giếng chứng dương (positive control), một giếng chứng âm (negative control) và 5 giếng còn lại được gắn bởi 5 loại kháng thể bắt giữ đặc hiệu tương ứng với 5 loại nọc rắn độc cần
phát hiện (hình 1.10.a) [60]. Sự thay đổi này làm cho bộ xét nghiệm sử dụng tiện lợi hơn và có thể sản xuất hàng loạt. Bộ xét nghiệm này phát hiện nọc của 5 loài rắn độc phổ biến ở Úc: rắn nâu (Pseudonaja textilis), rắn lục gây chết (Acanthophis antarcticus), rắn nâu chúa (Pseudechis australis), rắn taipan (Oxyuranus scutellatus) và rắn hổ (Notechis scutatus). Bộ xét nghiệm này có thể phát hiện nọc rắn độc trong dịch vết cắn và mẫu nước tiểu của bệnh nhân bị rắn độc cắn [60].
Hình 1.10. Kít phát hiện nọc rắn độc ở Úc (1.10a) và Ấn Độ (1.10b)
*Nguồn: http://www.csl.com.au và Anindya Kanti De (1996) [15]
Bộ xét nghiệm của Úc đã được sử dụng trong lâm sàng với độ nhạy phát hiện nọc rắn là 2,5 ng/ml trong khoảng thời gian nhỏ hơn 20 phút. Độ đặc hiệu của xét nghiệm trong việc phát hiện nọc độc của 5 loại rắn độc chủ yếu hay gặp ở Úc được khảo sát trong khoảng nồng độ nọc độc dao động từ 10 – 40 ng/ml pha trong dung dịch đệm PBS. Kết quả cho thấy ở nồng độ nọc độc 10 ng/ml thấy xuất hiện phản ứng chéo giữa kít xét nghiệm đặc hiệu loài rắn độc này với kháng nguyên nọc rắn của loài rắn khác. Giếng có phản ứng chéo (cường độ màu tính theo OD) yếu hơn so với giếng có phản ứng đặc hiệu [106]. Cơ sở phân tử của việc xuất hiện phản ứng chéo trong SVDK của
Úc đó là do các loại nọc rắn độc thuộc cùng 1 họ thường có các thành phần độc tố giống nhau như: three finger toxins, phospholipase A2 và enzyme hoạt hóa prothrombin. Các thành phần độc tố này quyết định tính đặc hiệu của các kháng thể đơn giá dùng làm kháng thể bắt giữ trong SVDK. Vai trò của từng thành phần độc tố gây ra phản ứng chéo với kít phát hiện một trong 5 loại rắn ở Úc đã được khảo sát bởi Steuten và cộng sự (2007) [106].
Ở Ấn độ, Anindya (1996) đã phát triển một bộ xét nghiệm AB-ELISA (Avidin – Biotin – Enzyme linked immunosorbent assay) đặc hiệu loài, có khả năng nhận biết được nọc độc của 4 loài rắn độc phổ biến ở Ấn Độ là:
Bungarus caeruleus, Naja naja, E. Carinatus và daboia russelli russelli. Toàn
bộ xét nghiệm mất khoảng 30 phút kể cả ủ, rửa và đọc kết quả. Xét nghiệm có thể tiến hành đơn giản ở nhiệt độ phòng, phản ứng màu có thể đọc bằng mắt thường. Bộ xét nghiệm có thể phát hiện nọc độc ở nồng độ 1 ng/ml. Bộ xét nghiệm này đã chứng minh hiệu quả trên lâm sàng với khả năng phát hiện nọc rắn độc trong các mẫu máu, huyết thanh, nước tiểu và dịch vết cắn được lấy từ 27 bệnh nhân bị rắn độc cắn [15].
Cho dù những bộ xét nghiệm của Úc và Ấn độ (hình 1.10) được chứng minh là hữu ích trong chẩn đoán rắn độc cắn, nhưng những bộ xét nghiệm miễn dịch này không phù hợp cho việc phát hiện nọc rắn độc ở các khu vực khác trên thế giới vì có sự khác nhau về phân bố các loài rắn giữa các khu vực. Các nghiên cứu về thành phần nọc độc của các loài rắn khác nhau cho thấy mỗi loài rắn độc có một thành phần nọc độc đặc trưng và do vậy việc phát hiện nọc độc của mỗi loài riêng biệt cần có các xét nghiệm có tính đặc hiệu loài riêng rẽ, vì thế mỗi vùng lãnh thổ cần phát triển các bộ xét nghiệm riêng biệt để phát hiện nọc độc của các loài rắn độc phân bố trên chính khu vực đó [80], [81].
CHƯƠNG 2