KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.2.3. nhạy của xét nghiệm AbE-ELISA
Độ nhạy của xét nghiệm AbE-ELISA cũng đạt mức ng/ml và thấp nhất trong dung dịch đệm là 0,5 – 1 ng/ml tùy thuộc loại nọc rắn (bảng 3.6). Độ nhạy phát hiện nọc rắn độc của xét nghiệm AbE-ELISA trong nghiên cứu này tương tự với độ nhạy phát hiện nọc rắn độc của xét nghiệm ELISA sandwich 3 kháng thể do Selvanayagam chế tạo năm 1999 [44]. Một bộ xét nghiệm ELISA sandwich 3 kháng thể khác phát hiện nọc rắn hổ ở Đài Loan được nghiên cứu bởi Hung Dong-Zong và cộng sự năm 2003 cho thấy độ nhạy phát hiện nọc rắn là 1 ng/ml [56]. Bên cạnh độ nhạy phát hiện tốt ở mức 0,5 – 1 ng/ml, bộ xét nghiệm AbE-ELISA trong nghiên cứu này còn có khả năng phát hiện nọc rắn độc trong các mẫu dịch sinh học như máu toàn phần, huyết tương, nước tiểu (biểu đồ 3.7). Như vậy, xét nghiệm AbE-ELISA với việc sử dụng kháng thể gắn bản là kháng thể ngựa làm kháng thể bắt giữ có độ nhạy phát hiện tương đương với các xét nghiệm ELISA sandwich 3 kháng thể do các tác giả nước ngoài chế tạo, có sử dụng kháng thể gắn bản là các phân tử IgG nguyên vẹn.
Một câu hỏi đặt ra đó là liệu với độ nhạy phát hiện nọc rắn độc ở mức 2 – 4 ng/ml trộn trong nước tiểu hoặc máu toàn phần thì có thể phát hiện được nọc rắn độc trên các mẫu bệnh phầm lâm sàng hay không? hay cần phải nghiên cứu để làm tăng thêm độ nhạy phát hiện nọc rắn của xét nghiệm này?. Kể từ khi Theakston và cộng sự (1977) là những người đầu tiên chế tạo thành công xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn độc, cho đến nay đã có rất nhiều
xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn độc được chế tạo và ứng dụng phát hiện nọc rắn độc ở nhiều nước trên thế giới. Trong đó bộ xét nghiệm có độ nhạy phát hiện nọc rắn độc thấp nhất được công bố là 0,1 pg/ml [13]. Bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc thương phẩm do CSL của Úc sản xuất với độ nhạy phát hiện ở mức 2,5 ng/ml đã chứng minh được hiệu quả chẩn đoán loài rắn độc cắn trên lâm sàng [45], [106], [116]. Do vậy, với độ nhạy phát hiện nọc rắn độc ở mức 2 – 4 ng/ml thì bộ xét nghiệm AbE-ELISA trong nghiên cứu này hoàn toàn có thể phát hiện được nọc rắn độc trên lâm sàng.
4.2.4. Phản ứng chéo của xét nghiệm AbE-ELISA với nọc của một số loàirắn độc khác ở Việt Nam rắn độc khác ở Việt Nam
Bằng việc sử dụng 4 mẫu nọc chuẩn lục xanh, hổ đất, chàm quạp và hổ chúa ở các nồng độ khác nhau để thực hiện xét nghiệm AbE-ELISA. Tôi nhận thấy rằng, ở mọi nồng độ nọc rắn chuẩn < 200 ng/ml không thấy xuất hiện phản ứng dương tính giả của kít phát hiện nọc rắn lục xanh và hổ đất với 3 loại nọc rắn chuẩn khác loài được khảo sát (xem biểu đồ 3.8).
Một điều đáng tiếc đó là đề tài đã không có được nhiều nguồn nọc độc của các loài rắn khác ngoài bốn loại nọc rắn chuẩn trong nghiên cứu này, cũng như nọc của các loài động vật khác như ong, bọ cạp... để đánh giá phản ứng chéo có thể xảy ra giữa kít xét nghiệm AbE-ELISA với các loại nọc độc đó. Nếu làm được như vậy sẽ hạn chế được phản ứng dương tính giả có thể xảy ra trong quá trình ứng dụng bộ xét nghiệm này trên lâm sàng và làm tăng độ đặc hiệu của xét nghiệm AbE-ELISA trong chẩn đoán xác định loài rắn.
Bộ xét nghiệm thương phẩm do CSL sản xuất đã được ứng dụng rộng rãi tại Úc và Papua New Guinea [106], [109]. Tuy nhiên, bộ xét nghiệm này chỉ có độ đặc hiệu cao khi nồng độ nọc độc dao động trong khoảng 10 ng/ml đến 40 ng/ml. Nồng độ nọc rắn độc cao trên 40 ng/ml thì xuất hiện phản ứng chéo giữa kít phát hiện nọc rắn này với nọc của loài rắn khác . Mặc dù vậy,
những giếng có phản ứng chéo bao giờ cũng có cường độ màu yếu hơn so với giếng có phản ứng đặc hiệu. Trên thực tế, trong một số trường hợp vẫn cho kết quả dương tính giả khi bệnh nhân bị một loài rắn khác không thuộc 5 loài rắn có trong bộ kít cắn, nhưng lại có phản ứng chéo với kít chẩn đoán của một trong 5 loài rắn [45], [106].