D. PHA Tĩnh TRÊN Nền Mạch CARBON
4. Bơm phải có độ bền cao và không quá đắt.
3.4. Cột tách sắc ký
Cột tách là bộ phận chính của quá trình sắc ký. Vì mọi diễn biến của sự tách một hỗn hợp chất mẫu là xẩy ra ở đây và kết quả của sự tách tốt hay không tốt thì cột tách luôn luôn là một yếu tố chính quyết định. Vì thế Ng−ời ta nói cột tách là trái tim của hệ thống sắc ký cũng là hoàn toàn đúng. Cột tách HPLC đ−ợc chế tạo bằng thép đặc biệt trơ với hoá chất, chịu đ−ợc áp suất cao đến vài trăm bar, có khi đến 1000 bar. Thông th−ờng có độ rộng từ 2 – 4,5 mm, chiều dài từ 10 - 25 cm cho mục đích phân tích. Trong cột tách là pha tĩnh ( chất nhồi cột ). Nó là pha tĩnh (SP) của các hệ sắc ký, đ−ợc nhồi vào cột theo cách nhồi cột đã trình bày ở ch−ơng II ( mục 2.13 ).
Cột tách cũng có thể đ−ợc chế tạo với vỏ chịu áp lực bằng thép, còn ống trong cùng là bằng thạch anh. Loại cột này th−ờng dùng trong quá trình tách loại pha động có môi tr−ờng axit cao và có chất tạo phức mạnh, mà thép không có khả năng chịu đựng đ−ợc. Vì thế cũng không đ−ợc dùng phổ biến nh− cột ống thép. Kích th−ớc của cột tách đ−ợc chia theo mức độ sắc ký, nh−ng nói chung đ−ợc phân chia nh− trong bảng sau đây (bảng 3.1).
Về cấu tạo, cột tách đ−ợc mô tả nh− trong hình 3.7. Nó bao gồm thân cột tách, hai đầu nút nối dây dẫn và các lọc đặt ở hai đầu cột để giữ pha tĩnh lại trong cột. Từ năm 1999 có thêm cột Mini ( dài: 3-5 cm và ID:1-1,5mm) cho hệ sắc ký lỏng siêu áp (UHPLC).
Song một điều chúng ta phải chú ý ở đây là trong một mức độ nhất định thì đ−ờng kính hay nói chung là kích th−ớc của cột sắc ký cũng có ảnh h−ởng
đến kết quả tách sắc ký của một hỗn hợp mẫu cụ thể. Vì thế nếu chọn đ−ợc cột tách có kích th−ớc phù hợp nhất, thì chúng ta sẽ có kết quả tách tốt nhất ( hình 3.8 ). Bảng 3.1. Sự phân chia mức độ tách sắc ký No Mức độ Chiều dài L (mm) Đ−ờng kính( mm) 1 Vi phân tích 30 - 50 1- 1,5 2 Phân tích th−ờng 125 - 250 2,5 – 4,5 3 Bán điều chế 250 - 500 5 – 8 4 Điều chế nhỏ 500- 1000 10 – 20 5 Sản xuất 1000- 2000 20 – 50
Hình 3.7a. Cấu tạo của cột tách trong HPLC
Hình bổ đôi cột. Sơ đồ cấu tạo nguyên tắc