D. PHA Tĩnh TRÊN Nền Mạch CARBON
6. Nhiệt độ cột tách trong quá trình sắc ký.
2.10. ảnh h−ởng của nhiệt độ
Trong nhiều tr−ờng hợp, nhiệt độ cũng là một yếu tố có góp phần ảnh h−ởng đến kết quả tách sắc ký của một hỗn hợp chất mẫu. Nói chung, khi tăng nhiệt độ trong một phạm vi nhất định th−ờng làm tốt hơn kết quả tách sắc ký của một hỗn hợp chất trong những điều kiện đã chọn. Sắc đồ trong hình 2.35a và hình 2.35b là ví dụ về ảnh h−ởng của nhiệt độ đến kết quả tách sắc ký. Song cũng có nhiều tr−ờng hợp sự tăng nhiệt độ hầu nh− không có ảnh h−ởng.
Tác dụng của nhiệt độ ở đây có thể qua các yếu tố sau đây mà ảnh h−ởng đến kết quả sắc ký.
• Làm thay đổi, th−ờng là làm giảm độ nhớt của pha động có lợi cho hiệu lực của cột tách.
• Khi nhiệt độ tăng thúc đẩy sự diễn biến của các cân bằng trong cột tách. • Khi nhiệt độ tăng sẽ làm thay đổi khả năng hấp phụ của pha tĩnh đối với chất tan, nghĩa làm thay đổi sự l−u giữ của chất tan.
• Khi nhiệt độ tăng th−ờng làm tăng độ tan của chất tan trong pha động. Do đó làm thay đổi các cân bằng trong cột tách, ảnh h−ởng đến độ chọn lọc của hệ pha HPLC.
Các yếu tố trên dẫn đến làm thay đổi một ít hệ số dung tích ki’ của mỗi chất tan có trong hỗn hợp mẫu, để cuối cùng làm thay đổi hiệu quả tách sắc ký ứng với mỗi nhiệt độ khác nhau. Qua nhiều thực nghiệm ng−ời ta thấy rằng, khi tăng nhiệt độ cột tách lên 30oC, thì hệ số dung tích ki’ của chất tan th−ờng giảm đi từ 1,5 đến 2 lần.
Nh−ng cần l−u ý rằng trong thực tế không phải bất kỳ tr−ờng hợp nào khi tăng nhiệt độ ta cũng có kết quả tách tốt hơn. Bởi vì nhiệt độ có ảnh h−ởng đến sự tồn tại và độ bền của hệ pha, pha tĩnh và pha động. Đồng thời cũng ảnh h−ởng đến cả sự tồn tại của chính bản thân các chất tan trong hỗn hợp mẫu. Vì thế khi muốn tăng nhiệt độ của quá trình sắc ký cần xem xét cẩn thận theo từng tr−ờng hợp cụ thể, để chọn đ−ợc nhiệt độ tách phù hợp cao hơn nhiệt độ phòng. Nếu không chúng ta sẽ làm mất chất mẫu, chất mẫu hay một thành phần của pha động bị phân huỷ hay bay hơi, làm sai kết quả sắc ký.
Thông th−ờng trong phân tích HPLC nhiệt độ cao nhất cũng chỉ đến 75oC là cùng.
H
tốc độ tuyến tính, u (phút) t
Hình 2.35a. ảnh h−ởng của nhiệt độ đến sự tách trong HPLC
(a): ảnh h−ởng của nhiệt độ đến chiều cao đĩa Hi ở các tốc độ u khác nhau, trong sự tách của Ino ( inosin ), Ade ( adenosin ), Cyt ( xyttosin ) thuộc nhóm nucleoside
và nucleobaze.
Hình 2.35b. Về ảnh h−ởng của nhiệt độ đên sự tách ( độ phân giải )