C X= (∆X.HX )/( Htch H X) (4.3)
4. Các −u nh−ợc điểm và Phạm vi ứng dụng
Đây là vấn đề chính, vì thế nên chỉ trong vòng 4 năm ( 2000-2004 ), chỉ riêng hãng Waters (USA) đã cung cấp ra thị tr−ờng thế giơí trên 1000 hệ máy UPLC. Trong đó 39% ở khu vực châu Mỹ, 30% ở châu âu, 20% ở châu A, còn lại d−ới 10% trong các n−ớc châu lục khác.
Vậy −u điểm của UPLC là gì ? Chúng ta có thể nói tóm tắt mấy ý chính: 1. Tốc độ cao, th−ờng gấp 3-4 lần kỹ thuật HPLC. Vì trong HPLC, một thí nghiệm tách phải mất 10-15 phút, còn trong UPLC chỉ mất d−ới 4 phút. Nên tiết kiệm thời gian, hay số lần thí nghiệm tách sẽ gấp 4 lần HPLC.
2. Độ nhạy cao, cỡ ppb và ppt. 3. Độ chọn lọc cao.
4. Có một khoảng rộng của giá trị u mà vẫn có sự tách tốt ( N lớn ), ví trong vùng này tốc độ tuyến tính u thay đổi rất ít, hình 5.3.
5. Dung môi ( pha động ) tốn ít, chỉ bằng 1/4 so với HPLC ( bảng 5.3 ). Đây là vấn đề kinh tế, để giảm giá thành chi phí phân tích. Bởi vì trong HPLC chi phí cho dung môi làm pha động là lớn nhất ( nhiều nhất, đến 50% chi phí chung ).
6. Với tính năng nh− trên, nh−ng giá mua một hệ UPLC, cũng chỉ đắt hơn hệ HPLC cùng chức năng chỉ ch−a đến 15%, đây là khó khăn cho một số cơ sở và phòng thí nghiệm nhỏ không có đủ kinh phí để đổi mới trang bị UPLC. Song xét về mặt kinh tế, thì nó lại mang lại nhièu lợi ích hơn, nhất là giá chi phí phân tích đáp ứng đ−ợc thực tế ( không đắt hơn HPLC ).
Chính vì có những đặc tính trên, nên tuy mới ra đời nh−ng, UPLC đã đ−ợc sử dụng khá nhiều và phát triển rất nhanh, chỉ trong 5 năm ( 2000-2004 ) thế giới đã có đến gần 5.000 hệ UPLC đang đ−ợc dùng trong các lĩnh vực.
1. Công nghiệp Hoá d−ợc và kiểm nghiệm thuốc
2. Phân tích môi tr−ờng ( đối t−ợng đất, n−ớc, không khí, sinh học ) 3. Phân tích thực phẩm
4. Hoá hữu cơ và hoá dầu 5. Trong Sinh và y học, …
Sau đây chúng ta có thể xem một vài ví dụ ứng dung trong các lĩnh vực khác nhau trong các Hình 5.5. Hình 5.6. Hình 5.7.
Hef
______________________________________________ 0 0,4 0,8 1,2 1,6 2,0 2,4
Tốc độ tuyên tính, u ( mm/phút )ặ
Bảng 5.3. So sánh 2 kỹ thuật HPLC và UPLC Khi tách một hỗn hợp mẫu Các chỉ tiêu HPLC UPLC Cột tách: XTerra C18, 50x4,6 mm AcQuity, C18, 50 x2,1 mm Cỡ hạt ( àm): 4,6 1,7 Mẫu nạp (àm): 20 5
Pha động ACN/H2O :25/75 ACN/H2O:36/64
FMP ( mL/ph.): 2,0 0,6 Thời gian tách 10 phút 2,0 phút Số đĩa, Nef: 4500 7500 Độphângiải(USP): 3,2 3,4 Tổng MP: 22 mL 4,5 mL LOQ : 0,1àg/mL 0,054 àg/mL V delay : 720 àL 110 àL
Hình 5.5.
Tài liệu tham khảo
1. L.R. Snyder and J.J Kirkland
Introduction to Modern Liquid Chromatogrphy
Second Publ. by Wiley. New York, 1981 2. Heinz Engelhardt
Hochdruck-Flussigkeits-Chromatographie
Springer_Verlag. Zweite Auflage. Berlin Heidelberg- New York. 1977 3. C.F. Simpson
Practical High Performance Liquid Chromatography
Published by Heyden and Son Limited. 1979 4. Veronika R. Mayer ( Laborbucher Chemie )
Praxis der Hochleitungs-Flussig-Chromatographie
Otto Salle Verlag & Verlag Sauerlander. Sechste Auflage. 1990 5. Gay Aced, Hermamn J. Mockel
Liquid Chromatogrphie
Apparative, theoretische und methodische Grundlagen der HPLC
Weinheim - New York - Cambridge - Basel. VCH. 1991 6. Douglas A. Skoog & James J. Leary
Chaper 24. An Introduction to Chromatogrphic Separation Chaper 26. High Performance Liquid Chromatogrphy In Book: Principles of Instrumental Analysis
Saunders College Publishing. 4th Edition. 1992 7. Stanley Blackburn,Ph.D., C.Chem.,F.R.S.C.
CRC Handbook of Chromatogrphy: Amino Acids and Amines. Vol. I & II
CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. 1983. 8. Phạm Luận
Bài giảng CĐ : Về cơ sở lý thuýết về HPLC
Hanội-Amsterdam University.1987 9. Johann Korkisch, Ph.D
Handbook of Ion Exchange Resine
Their Application to Inorganic Analytical Chemistry
CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. 2000 10. Agilent Company
Application Notes
Agilent Company. 2000 11. Perkin Elmer Copmany
Application Notes
12. Lê Huyền D−ơng
Luận án Tiến sỹ. ĐHQG Hà nội. 2000
13. Shimadzu
Application Dât Book
( for Shimadzu High Performance Liquid Chromatographys ) Shimadzu, Jâpn. 1999
14. Johann Korkisch, Ph.D.
HandBook of Inon Exchange Resin
( Their Application to Inorganic Analytical Chemistry ). Volume II NXB. CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. 2000
15. Gunter Zweig, Ph.D & Joseph Sherma, Ph.D
CRC Handbook of Chromatography
( Amino Acids and Amines ). Volume I
NXB. CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. 1987 16. Waters Corporation
Ultra Performance LC Seminar
October 2005
17. Waters Corporation
Supplement to LC
Ultra Performance LC Separation Science Redefined
May 2005
--- --
Các bảng phụ lục
--- --