C X= (∆X.HX )/( Htch H X) (4.3)
1. Yêu cầu của thực tế tách và phân tích HPLC
Sau những năm 1995 ( những năm cuối của thế ký 20 ), do thực tế của nghiên cứu khoa học và của sản xuất công nghiệp, nông nghiệp, kiểm tra phân tích thực phẩm, môi tr−ờng,.. làm sao phải có các kỹ thuật tách và phân tích sắc ký HPLC nhanh hơn, thoả mãn và đảm bảo đ−ợc các yêu cầu:
1. Tốc độ cao ( high Speed )
2. Độ nhạy cao ( high Sensitivity ) 3. Độ phân giải cao ( high Resolution ) 4. Độ chọn lọc cao ( high Selectivity ) 5. Tốn it dung môi ( tính kinh tế cao ), …
Đó là các vấn đề của thực tế đặt ra của thời đại, các nhà khoa học, thiết kế chế tạo máy sắc ký ( HPLC ) phải suy nghĩ và muốn đáp ứng đ−ợc thực tế đó của sự phát triển, tất nhiên không có cách nào khác là phải đổi mới tất cả công nghệ chế tạo phần cứng của các hệ máy HPLC, các chất nhồi cột ( pha tĩnh của HPLC ) phải có kích th−ớc hạt nhỏ d−ới 2 àm để rút ngắn thời gian tách. Tiếp đó là các ch−ơng trình ( phần mềm ) điều khiển hệ máy HPLC mới hoạt động với tốc độ cao. Cụ thể đặt ra cho các nhà khoa học và chế tạo máy HPLC là phải giaỉ quyết các vấn để chính sau đây, tứ là đ−a HPLC đến UPLC ( Ultrra Performance Liquid Chromatography ):
1. Chế tạo các pha tĩnh có cỡ hạt nhỏ hơn 2 àm với độ xốp cao và chịu áp cao hơn nữa ( đến trân 1500 Bar). Đây là vấn đề của hoá học.
2. Phát triển và cải tiến các trang thiết bị của HPLC, công nghệ phần cứng, để có các Detector với FlowCell rất nhỏ ( 2àmL< ) và độ nhạy cao. Các van bơm mẫu có khả năng bơm đ−ợc l−ợng mẫu d−ới 5 àL, song phải chính xác và lặp lại tốt.
3. Xây dựng các ch−ơng trình điều khiển hoạt động của các hệ HPLC mới, tức là công nghệ phần mềm tốc độ cao.
Thực tế đó đã cuốn hút các nhà khoa học, các hãng sản xuất chế tạo trang thiết bị cho HPLC nghiên cứu phát triển, hoàn thiện để có đ−ợc và đ−a ra các hệ thống HPLC mới. Hãng Waters là ng−ời đi tiên phong trong lĩnh vực UPLC và phát triển rất nhanh các ý t−ởng mới đ−a HPLC đến UPLC. Sau đó là Agilent, Perkin Elmer, Thermo Elements, … Đến nay, 2004, trên toàn thế giới đã có trên 3000 hệ thống máy sắc ký lỏng Siêu áp, UPLC đang hoạt động, trong số đó riêng hãng Waters đã cung cấp đến 1100 hệ thống ( có 39
% là ở Mỹ, 31 % ở châu Âu, và 11% là ở Nhật, còn lại là trong các n−ớc khác).
2. Sự phát triển HPLC lên UPLC 2.1. Pha tĩnh ( chất nhồi cột )