... bằng isopropanol (tỉ lệ 1:1) ở 0
o
C, các phân tử DNA có trọng lượng phân tử
thấp không bị kết tủa.
>>> Sau đó ly tâm ta sẽ thu được cặn (DNA, RNA), cặn được rửa bằng cồn 70% để
loại bỏ ... bỏ muối và isopropanol còn lại.
Bước 4. Hoà tan căn (DNA, RNA) và xử lý loại bỏ RNA bằng enzyme
Ribonuclease. Sau đó kết tủa lại được DNA.
...
... nhƣ kit Elisa, kit
tách chiết DNA, kit táchchiết plasmid, kit PCR,…
21
Thông thƣờng kit táchchiếtDNA dựa trên 4 bƣớc cơ bản trong quá trình tách
chiết DNA là phân giải tế bào, ... kit táchchiếtDNA 19
3.4.2.1 TáchchiếtDNA từ cơ vân (Lê Thị Thu Phƣơng, 2004) (qui trình I) 19
3.4.2.2 Phƣơng pháp tối ƣu hóa qui trình táchchiếtDNA 21
3.4.2.3 Xây dựng bộ kit táchchiết ... hàm lƣợng DNA.
3.4.2.4 Hiệu quả của bộ kit táchchiếtDNA đối với mô máu và da
Trong quá trình thiết lập bộ kit táchchiết DNA, chúng tôi sử dụng cơ vân là
nguồn mẫu táchchiết DNA. Để nâng...
...
Biểu đồ 4.1 DNAtáchchiết theo qui trình I và II 31
Biểu đồ 4.2 DNAtáchchiết theo qui trình I và III 32
Biểu đồ 4.3 DNAtáchchiết theo qui trình I và IV 33
Biểu đồ 4.4 DNAtáchchiết theo ... kit táchchiếtDNA 19
3.4.2.1 TáchchiếtDNA từ cơ vân (Lê Thị Thu Phƣơng, 2004) (qui trình I) 19
3.4.2.2 Phƣơng pháp tối ƣu hóa qui trình táchchiếtDNA 21
3.4.2.3 Xây dựng bộ kit táchchiết ... hàm lƣợng DNA.
3.4.2.4 Hiệu quả của bộ kit táchchiếtDNA đối với mô máu và da
Trong quá trình thiết lập bộ kit táchchiết DNA, chúng tôi sử dụng cơ vân là
nguồn mẫu táchchiết DNA. Để nâng...
... 2,0 thì DNA hay RNA
được xem là sạch protein.
1.1.1. Phương pháp táchchiết DNA
-
DNA có kích thước lớn do đó cần tránh các tách
nhân gây đứt gãy.
-
DNA genome (ĐV, TV) sau khi táchchiết ... chọn
phương pháp chiếttách ADN cho phù hợp
•
Phương pháp táchchiết RNA toàn phần cũng tương tự
DNA. Chỉ khác là ở bước cuối cùng dùng enzyme Dnase loại
bỏ DNA.
•
Táchchiết mRNA
-
Dựa ... và isopropanol
còn lại.
Bước 4. Hoà tan căn (DNA, RNA) và xử lý loại bỏ
RNA bằng enzyme Rnase. Sau đó kết tủa lại được DNA.
1.1.2. PP táchchiết RNA tổng số và mRNA
-
Chú ý:
+ Phân tử RNA...
... protease:
Tách enzym: Như trên đã nói, để tách enzym từ môi trường nuôi cấy theo VSV theo
phương pháp bề mặt, có thể dùng dung dịch đệm thích hợp, dung dịch muối loãng hoặc
nước để chiết rút ... mạnh,
Trang 11/101
Chiết ,tinh chế và ứng dụng của enzyme
3.2.2. Hướng thứ 2: Hướng này sử dụng enzyme không kiên quan đến tế bào sống của
VSV. Ở đây các loại enzyme được tách ra khỏi tế bào ... bia
bằng nguyên liệu thay thế malt).
Nếu enzyme tách khỏi sinh khối, nước và thành phần môi trường ta có enzyme hoàn
toàn sạch. Các enzyme tinh chiết theo kiểu này thường được dùng để sản xuất...
... cả chúng sẽ tách cùng một lƣợt ra khỏi cột.
Thí dụ giới hạn tách của G-50 có phạm vi tách từ 1.500-30.000 Da, có nghĩa là các
phân tử lớn hơn đều không chui vào hạt gel.
Phạm vi tách (Fructionation ...
Tôm sú (đầu hoặc nội tạng)
Nghiền mịn
Chiết dịch enzyme thô
Ly tâm dịch chiết enzyme thô
Dịch chiết enzyme thô (DC)
Tủa dịch chiết
Ly tâm thu chế phẩm thô
Chế phẩm thô (CPT) ... để
tách chiết chúng.
xi
DANH SÁCH HÌNH VÀ ĐỒ THỊ
Hình Trang
Hình 2.1. Tôm sú 9
Hình 2.2. Công thức cấu tạo protease 10
Hình 2.3. Nguyên tắc hoạt động của sắc ký 17
Hình 2.4. Tách...
... chế để táchchiết một số
hợp chất thứ cấp từ phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn mạnh nhất.
- Gửi mẫu chạy phổ cộng hƣởng từ hạt nhân để xác định cấu trúc của các hợp
chất đƣợc táchchiết ở ... Khảo sát tính kháng khuẩn của các phân đoạn đƣợc chiết từ cao chloroform
Hình 3.4: Sắc ký điều chế
v
MIC
salmonella
= 500 µg/ml.
- Táchchiết đƣợc 18 phân đoạn và xác định đƣợc phân đoạn ...
khuẩn để tách chất sạch. Thời gian thực hiện từ ngày 5/7/2007 đến ngày
19/7/2007.
- Giai đoạn 6: Gửi mẫu chạy phổ cộng hƣởng từ hạt nhân để xác định cấu trúc
của các hợp chất đƣợc tách chiết...
... độ) tăng.
Lƣợng dung môi tăng làm thay đổi pH của môi trƣờng tách chiết.
Với các ảnh hƣởng trên đã làm cho lƣợng chất tan chiếttách đƣợc tăng khi tỷ
lệ mẫu/dung môi tăng.
Cả mẫu đầu và ... giảm, do lƣợng protein không mong muốn táchchiết tăng ảnh hƣởng
đến hoạt tính enzyme, có thể xảy ra khả năng thủy phân lẫn nhau cao.
Nhƣ vậy khả năng táchchiết protease từ mẫu đầu và nội tạng ... cả chúng sẽ tách cùng một lƣợt ra khỏi cột.
Thí dụ giới hạn tách của G-50 có phạm vi tách từ 1.500-30.000 Da, có nghĩa là các
phân tử lớn hơn đều không chui vào hạt gel.
Phạm vi tách (Fructionation...
... chế để táchchiết một số
hợp chất thứ cấp từ phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn mạnh nhất.
- Gửi mẫu chạy phổ cộng hƣởng từ hạt nhân để xác định cấu trúc của các hợp
chất đƣợc táchchiết ở ...
MIC
salmonella
= 500 µg/ml.
- Táchchiết đƣợc 18 phân đoạn và xác định đƣợc phân đoạn có hoạt tính kháng
khuẩn là XH9, XH10, XH11, XH12, XH13.
- Tiến hành táchchiết trên phân đoạn có hoạt tính ... đƣợc thực hiện qua 2 phần:
Phần 1: Tiến hành táchchiết một số hợp chất thứ cấp từ lá Xuân Hoa và khảo sát tính
kháng khuẩn.
- Giai đoạn 1: Tiến hành chiết Soxhlet lá Xuân Hoa để thu các loại...
...
khuẩn để tách chất sạch. Thời gian thực hiện từ ngày 5/7/2007 đến ngày
19/7/2007.
- Giai đoạn 6: Gửi mẫu chạy phổ cộng hƣởng từ hạt nhân để xác định cấu trúc
của các hợp chất đƣợc táchchiết ... càng dài thì sự tách càng tốt.
Tiến hành:
Bƣớc 1: Chuẩn bị cột.
- Rửa cột thật sạch, tráng lại với nƣớc cất, sau đó sấy khô.
v
MIC
salmonella
= 500 µg/ml.
- Táchchiết đƣợc 18 phân ... loại cao.
Dịch trích Ete
dầu hỏa
Bột khô 670 g
chiết soxhlet với EtOH 70%
Dịch trích EtOH Bã
Pha nƣớc
cô quay, chiết với ete dầu hỏa
14
- Acid palmitic: Là chất rắn màu...
...
3.4.3.1. Xác định dung môi và chế độ táchchiết protease từ nội tạng và
đầu tôm sú thích hợp
Dung môi chiết có ảnh hƣởng đến hoạt tính của enzyme. Tiến hành chiết
tách protease từ mẫu nội tạng và ... sát khả năng táchchiết protease từ mẫu đầu và nội tạng
tôm của dung môi: nƣớc cất, nƣớc muối sinh lý, đệm phosphate và Tris-HCl với các
tỷ lệ khác nhau. Chọn ra dung môi với tỷ lệ chiết thích ... giết chết bằng cách trộn với nƣớc đá vụn, tỷ lệ tôm /đá là 1:3,
sau đó tách lấy đầu hoặc nội tạng. Đầu và nội tạng đƣợc tách riêng 20 cái/bao
nylong đƣợc bảo quản trong tủ đông sâu -20
o
C để...
...
CHƯƠNG 2. MỘT SỐ CÔNG NGHỆ TÁCH
CHIẾT ENZIM
Tách chiết enzim
Làm cho tế bào trở nên thẩm thấu và giải phóng enzim khỏi tâm gắn của ... phá vỡ để thuận lợi cho giai đoạn tinh chế sau này.
Không làm biến tính enzim.
Quá trình táchchiết thực hiện ở nhiệt độ thấp.
•
Loại bỏ các mảnh tế bào
Loại bỏ toàn bộ các phần tử rắn, ... trường.
Cần thiết khi phá huỷ hoàn toàn thành tế bào VSV.
1. Các nguyên tắc chung
ξ1. NGUYÊN TẮC TÁCH CHIẾT
•
Các yếu tố ảnh hưởng hoạt tính enzim khi phá vỡ tế bào
Nhiệt độ: cần loại bỏ lượng...