V phải lấy để pha masterm
2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ QUI TRÌNH THỬ NGHIỆM HIV1 RT-TQPCR TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM
TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM
2.1 Kết quả đánh giá giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng
Kết quả làm xét nghiệm phát hiện và định lượng HIV1RNA dãy pha loãng HIV1RNA-C[+] có hàm lượng copies 1 đến 1010 copies trong 150ộl huyết tương chứng [-] được hiển thị ở biểu đồ khuếch đại trình bày trong hình 19.
Hình 19: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn dãy pha loãng HIVRNA-C[+] có hàm lượng copies 1 đến 1010 copies trong 150ộl huyết tương.
Kết quả biểu đồ khuếch đại cho phép xác định giới hạn phát hiện của qui trình thử nghiệm HIV1 RT-TQPCR là 10 copy trong 150ộl mẫu huyết tương, tương ứng 60 copies/1ml huyết tương. Kết quả biểu đồ chuẩn cũng trong hình 19 cho thấy khoảng định lượng tuyến tắnh là từ 60 đến 1011 copies/ml vì trong khoảng này kết quả E vẫn đạt 91%, trong giới hạn chấp nhận được (90-105%) và R2 là = 0.999, rất tuyến tắnh.
42
Kết quả làm xét nghiệm phát hiện và định lượng HIV1RNA 3 dãy pha loãng HIV1RNA-C[+] có hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương chứng [-]được hiển thị ở biểu đồ khuếch đại trình bày trong hình 20.
chất khuếch đại
Hình 20: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn 3 dãy pha loãng HIVRNA-C[+] có hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương.
Giá trị định lượng số copies HIV1RNA trong 150ộl huyết tương của 3 dãy pha loãng và giá trị CV được trình bày trong bảng dưới đây
Bảng 2: Giá trị định lượng HIV1RNA trong 3 dãy pha loãng và giá trị CV
Dãy 1 Dãy 2 Dãy 3 CV
154,123,651 156,972,893 157,448,451 0.9400137 11,126,682 10,168,442 9,011,445 8.5606362 973,478 1,160,998 1,139,175 7.673031 94,179 91,285 86,101 3.691667 7,779 7,366 7,810 2.6460421 1,047 1,077 1,080 1.3895255 71 74 85 8.2941005 19 15 27 24.908062 0 0 0
Phân tắch kết quả trong bảng 2 ta thấy giá trị định lương từ 100 copies trở lên thì độ lặp lại càng tốt (CV < 10%)
2.3 Kết quả đánh giá độ lặp lại liên phản ứng
Kết quả làm xét nghiệm phát hiện và định lượng HIV1RNA 3 dãy pha loãng HIV1RNA-C[+] có hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương chứng [-] với 3 lần xét nghiệm trong 3 ngày liên tiếp, mỗi ngày làm xét nghiệm cho một dãy pha loãng được hiển thị ở biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn trình bày trong hình 21, 22 và 23 .
Giá trị định lượng số copies HIV1RNA trong 150ộl huyết tương của 3 dãy pha loãng thực hiện trong 3 ngày liên tiếp và giá trị CV được trình bày trong bảng 3. Phân tắch kết quả trong bảng 3 ta thấy giá trị định lượng từ 100 copies trở lên thì độ lặp lại càng tốt (CV < 10%). Tuy nhiên nếu giá trị định lượng dưới 100 copies thì CV sẽ cao hơn giá trị chấp nhận được. Do vậy chúng ta có thể kết luận là, cũng như độ lặp lại trong phản ứng, các trị số định lượng từ 100 copies trở lên là có độ lặp lại cao dù làm xét nghiệm ở các ngày khác nhau.
43
Hình 21: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn dãy pha loãng HIVRNA-C[+] có
hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương được làm xét
nghiệm trong ngày 1
Hình 22: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn dãy pha loãng HIVRNA-C[+] có
hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương được làm xét
nghiệm trong ngày 2
Hình 23: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn dãy pha loãng HIVRNA-C[+] có
hàm lượng copies 1 đến 108 copies trong 150ộl huyết tương được làm xét
44
Bảng 3: Giá trị định lượng HIV1RNA trong 3 dãy pha loãng thực hiện trong 3 ngày
liên tiếp và giá trị CV
Dãy 1 (ngày 1) Dãy 2 (ngày 2) Dãy 3 (ngày 3) CV
183,710,770 153,979,650 154,315,235 8.4980485
12,511,725 11,725,262 10,466,395 7.2822337
1,057,751 1,008,788 1,173,487 6.3939588
97,388 97,296 90,341 3.4741914
8,824 8,192 7,632 5.924876
1,052 1,126 1,103 2.8364087
73 78 81 4.3466748
18 16 29 27.144497
0 0 0
2.4 Kết quả đánh giá độ đặc hiệu
Kết quả làm xét nghiệm phát hiện và định lượng HIV1RNA của 4 mẫu huyết tương dương tắnh HBV, HCV, CMV và S. aureus được trình bày trong biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn của hình 24. Kết quả này cho phép xác định qui trình xét nghiệm là đặc hiệu 100% trên các mẫu nhiễm các tác nhân khác không phải HIV1
Hình 24: Biểu đồ khuếch đại và biểu đồ chuẩn 4 mẫu huyết tương dương tắnh HBV, HCV, CMV và
