II. Mục ựắch và yêu cầu của ựề tài
3.4.4. Phương pháp phân tắch chỉ tiêu hoá học
3.4.4.1. Xác ựịnh hàm lượng ựường khử và ựường tổng số theo phương pháp Graxianop
Trong lõi ngô chứa chủ yếu là xylan (19 - 23%) mà sẽ ựược chuyển hoá thành ựường xylose, tuy nhiên còn có một số các loại ựường khác nhưng là rất nhỏ với hàm lượng không ựáng kể nên hàm lượng ựường khử RS sẽ phản ánh gián tiếp hàm lượng xylose, còn hàm lượng ựường tổng số TS sẽ phản ánh gián tiếp hàm lượng xylan. Vì vậy, khi tiến hành nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình thuỷ phân nguyên liệu sẽ tiến hành xác ựịnh hàm lượng ựường khử và ựường tổng số bằng phương pháp Graxianop.
đây là phương pháp ựược ứng dụng rộng rãi và chắnh xác. Cơ chế của phương pháp này ựược trình bày như sau:
Oxy nguyên tử sinh ra do phản ứng trên sẽ oxy hoá tiếp ựường ựể tạo thành Sacarit:
CH3CH(CHOH)4CHO + 3O COOH(CHOH)4COOH + H2O.
*) Xác ựịnh hàm lượng ựường khử (RS).
+) Cách tiến hành:
Hoà K3Fe(CN)6 1% với KOH 2.5% theo tỷ lệ 20:5 (dung dịch A). đong 25ml dung dịch A vào cốc chịu nhiệt, ựun sôi khoảng 1 - 2 phút, ựể nguội, thêm một giọt methylen xanh. Nhỏ từ từ dịch thuỷ phân lõi ngô cho ựến khi giọt ựầu tiên làm mất màu dung dịch A. Ghi thể tắch V vừa sử dụng, tắnh % ựường khử theo công thức:
% ựường khử = (a.f.100)/V Trong ựó: a: là hằng số thực nghiệm (= 0.0024).
f: là ựộ pha loãng.
V: Số ml dịch thuỷ phân ựã dùng ựể chuẩn ựộ. *) Xác ựịnh hàm lượng ựường tổng số (TS).
để xác ựịnh toàn bộ ựường trong mẫu, chúng ta tiến hành thuỷ phân ựể chuyển ựường không khử thành ựường khử (chủ yếu là các disaccarit thành các monosaccarit), sau ựó xác ựịnh hàm lượng ựường khử theo phương pháp trên.
3.4.4.2. Xác ựịnh thành phần các loại ựường bằng phương pháp HPLC sử dụng cột RPM monosaccharide (phenomenex) với dung môi là nước
Thành phần ựường có trong dịch thuỷ phân và dịch lên men ựược phân tắch bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp sử dụng cột RPM monosaccharide (phenomenex) với dung môi là nước. Nhiệt ựộ cột ựược duy trì ở 800C. Sử dụng glycerin làm nội chuẩn. Hàm lượng các loại ựường ựược tắnh thông qua chất chuẩn là các dung dịch ựường tương ứng ựã biết trước nồng ựộ.