II. Mục ựắch và yêu cầu của ựề tài
3.4.1. Sơ ựồ quy trình công nghệ sản xuất enzyme xylanse quy mô
nghiệm Bảo quản Tuyển chọn Cô ựặc dịch enzyme bằng màng siêu lọc Amicon Làm sạch ( thẩm tắch, cô ựặc) Tách chiết bằng sunfat amon
95%
Sản phẩm enzyme xylanse Nuôi cấy chủng trên môi trường dịch lõi ngô 2% ( pH =
6,0, To = 300C, nitơ = 1%)
Bộ chủng giống VSV ( nấm mốc)
Thuyết minh quy trình Bước 1. Bộ chủng giống
Nguồn giống ựược lấy từ trong bộ chủng giống VSV của Bộ môn nghiên cứu công nghệ sinh học - Viện Cơ ựiện nông nghiệp và Công nghệ sau thu hoạch, phân lập từ nguồn lõi ngô ( ựược thu thập ở Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc và Mê Linh, Hà Nội
Bước 2. Tuyển chọn
Từ các chủng trong bộ sưu tập và các chủng phân lập tiến hành tuyển chọn chủng nấm mốc có khả năng sinh enzyme xylanse, sử dụng môi trường khoáng Czapek Ờ Dox thay nguồn cacbon bằng 1% lõi ngô, thanh trùng ở 1210C, 1 atm trong 20 phút, ựể nguội, bổ sung giống, nuôi cấy lắc 200 vòng/phút ở 300C .
Bước 3. Nuôi cấy chủng
Tiến hành nuôi cấy chủng A.niger NVT3 trên môi trường dịch lõi ngô (2%) , pH = 6,0, nhiệt ựộ 300C, nguồn nitơ = 1%
Bước 4. Cô ựặc dịch enzyme
Sử dụng màng siêu lọc Amicon (PM10) có kắch thước lỗ cho phép các phân tử nhỏ dưới 10kDa ựi qua. Màng siêu lọc có tác dụng làm enzyme ựược tinh sạch một phần nhưng tác dụng chắnh là ựể cô ựặc dịch enzyme
Bước 5. Tách chiết bằng sunfat amon 95%
Sau quá trình cô ựặc ta tiến hành tách chiết enzyme xylanse bằng muối sunfat amôn. Khi ựưa muối sunfat amôn vào dung dịch chiết enzyme thì làm
thay ựổi lực tĩnh ựiện và các tương tác kỵ nước của enzyme và dẫn ựến sự mất cân bằng và các phân tử protein lắng xuống
Bước 6. Làm sạch
Sau quá trình tách chiết enzyme xylanse vẫn còn lẫn tạp chất ựể loại bỏ tạp chất và làm sạch sử dụng phương pháp thẩm tắch. đây là quá trình tách các phân tử có phân tử lượng thấp qua màng bán thấm, ựiều kiện ựể có thẩm tắch là tạo sự chênh lệch về nồng ựộ giữa bên trong và bên ngoài màng. Tỷ lệ dung dịch thẩm tắch và nước là 1:50, tạp chất ựược loại bỏ sau 20 giờ giảm 3,5- 4 lần .Sau quá trình thẩm tắch, ựem dịch enzyme cô ựặc ựược chế phẩm enzyme xylanse.
Bước 7. Sản phẩm
Sau quá trình làm sạch và cô ựặc ta thu ựược enzyme xylanse
Bước 8. Bảo quản
Bảo quản ở nhiệt ựộ lạnh