1.3. ATENOLOL, ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH
1.3.3. Các phương pháp phân tích atenolol và đồng phân đối quang
1.3.3.1. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong nguyên liệu, chế phẩm thuốc
Để định lượng ATN trong chế phẩm thuốc thường sử dụng phương pháp HPLC kết nối với đầu dò UV/DAD và phân tích trên cột HPLC pha đảo [4], [45], [200]. Tuy nhiên, các phương pháp định lượng này không phân tích, xác định được dạng ĐPĐQ của ATN, chỉ áp dụng định lượng S-ATN (mẫu đơn đồng phân) hoặc ATN toàn phần (mẫu racemic).
Dựa trên nguyên tắc của phương pháp phân tích ĐPĐQ và tính chất hóa lý của ATN, nhiều tác giả đã áp dụng phương pháp HPLC với cột phân tích đối quang hoặc phương pháp CE có sử dụng các tác nhân hoạt quang để phân tích các ĐPĐQ của ATN trong các mẫu nguyên liệu hoặc trong một số chế phẩm thuốc.
Các phương pháp HPLC phân tích các ĐPĐQ của ATN bằng cột pha tĩnh đối quang đã được công bố được liệt kê ở Bảng 1.11.
Các phương pháp CE phân tích ĐPĐQ của ATN được trình bày ở Bảng 1.12.
Bảng 1.11. Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ atenolol trong nguyên liệu và chế phẩm thuốc bằng phương pháp HPLC
Điều kiện sắc ký Các giá trị của phương pháp TLTK - Cột: Luxđ Cellulose, 250 x 4,6 mm; 5 àm
- Pha động: Gradient dung môi từ n-hexan : ethanol : DEA (90:10:0,5) tới n-hexan : ethanol : DEA (60:40:0,5). Tốc độ dòng: 1,3 ml/phút tới 2,3 ml/phút. Đầu dò: DAD.
- Đường chuẩn: 10–300 àg/ml - LOD: 22 àg/ml
- Thời gian lưu của R-ATN là 7,5’ và S-ATN là 8,5’
- Độ phân giải (Rs) < 2,0
[136]
- Cột: Chiralcel OD, 250 x 4,6 mm; 10 àm - Pha động: hexan : ethanol : diethylamin (75:25:0,1). Tốc độ dòng: 0,7 ml/phút
- Đầu dò: DAD, 276 nm
- Khoảng tuyến tính: 10–190 àg/ml cho R- và S-ATN
- tR: R-ATN là 9,9’; S-ATN là 12,0’. Rs 2,0
[163]
- Cột: Chirobiotic V2, 150 x 4,6 mm; 5 àm - Pha động: MeCN : MeOH : triethylamin acetat 0,5% (50:45:5), pH 4,5. Tốc độ dòng:
1,0 ml/phút. Đầu dò: DAD, 226 nm
- Thời gian phân tích: 40’
- Độ phân giải: 3,0
- LOD của R-ATN là 0,08% so với S-ATN
[158]
- Cột: Chirex 3022 (S), 250 x 4 mm; 5 àm - Pha động: hexan-dichloromethan-methanol- trifluoroacetic acid (35:35:5:0,25)
- LOD: 12,3 và 9,86 àg/ml cho R- và S-ATN.
- tR: 29,1’ và 32,7’. Rs < 2,0
[188]
- Cột: Chiral AGP, 150 x 4 mm; 5 àm
- Pha động: MeOH : đệm natri phosphat 10 mM (pH 7,0) tỷ lệ (5:95). Tốc độ dòng: 0,9 ml/phút. Đầu dò: DAD, 225 nm
- Khoảng tuyến tính: 10–400 àg/ml cho S-ATN
- tR: 8,2’ (R-ATN) và 9,4’ (S- ATN); Rs khoảng 1,5
[42]
- Cột: β-cyclodextrin, nhiệt độ cột 20 oC - Pha động: acetonitril : methanol : acetic acid băng : triethylamin (90:10:2,5:3). Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút
- Đầu dò: DAD, 275 nm
- Khoảng tuyến tính: 5–100 àg/ml cho R- và S-ATN
- Thời gian sắc ký: 20’.
- Rs = 1,7. Độ đúng: 94,6- 97,2%; độ chụm (RSD = 1,8%)
[44]
Nhận xét:
- Các cột HPLC phân tích các ĐPĐQ của ATN có thành phần pha tĩnh chứa các tác nhân hoạt quang khá đa dạng. Tác nhân chọn lọc hoạt quang liên kết với pha tĩnh có thể là kháng sinh vancomycin (cột Chirobiotic V2) [158], protein (cột Chiral AGP) [42]; chất chọn lọc hoạt quang kiểu Pirkle (cột Chirex 3022-S) [188], polysaccharid (cột Lux® Cellulose-1) [136], cột Chiralcel OD [163], hoặc β-CD và dẫn chất [44]. Sự phân tách các ĐPĐQ của ATN phụ thuộc vào pha tĩnh hoạt quang, tuy nhiên không có pha tĩnh hoạt quang đặc hiệu cho sự phân tách này.
- Đa số các phương pháp HPLC định lượng ĐPĐQ của ATN đã được công bố, giá trị độ phân giải giữa các pic R-ATN và S-ATN đều không cao (từ 1,5 đến không quá 2,0). Các pic đồng phân R-ATN và S-ATN tách không hoàn toàn, do đó ảnh hưởng đến độ đúng, độ chính xác của phương pháp phân tích. Phương pháp phân tích của Sami El Deeb [158] có độ phân giải tốt (Rs = 3,0) tuy nhiên thời gian phân tích trên 40 phút, tương đối dài không phù hợp khi cần phải phân tích đồng thời nhiều mẫu.
- Trong số các phương pháp HPLC định lượng ĐPĐQ của ATN nêu trên, chỉ có phương pháp của Sami El Deeb [158] phù hợp để xác định giới hạn tạp ĐPĐQ liên quan trong nguyên liệu hoặc chế phẩm thuốc chứa S-ATN (giá trị LOD cho đồng phân R-ATN của phương pháp bằng 0,08% so với hàm lượng S-ATN, đáp ứng yêu cầu giới hạn tạp chất R-ATN không quá 0,1% trong các mẫu nguyên liệu S-ATN). Các phương pháp còn lại [42], [136], [163], [188] giá trị LOD của phương pháp chưa phù hợp để xác định giới hạn tạp chất đối quang R-ATN trong các mẫu nguyên liệu S-ATN.
- Đa số các phương pháp HPLC phân tích ĐPĐQ của ATN sử dụng cột HPLC chứa pha tĩnh hoạt quang được nêu trong Bảng 1.11 đều sử dụng kiểu sắc ký pha thuận (pha động của hệ sắc ký có thành phần chính là các dung môi hữu cơ không phân cực).
Phương pháp của Chandra Mohan Eaga và cộng sự [42] phân tích trên cột sắc ký Chiral AGP (pha tĩnh đối quang α1-Glycoprotein) có kiểu sắc ký pha đảo (pha động của hệ sắc ký có độ phân cực cao và chứa dung dịch đệm natri phosphat). Các phương pháp HPLC định lượng ĐPĐQ của ATN kiểu pha thuận có thể ghép nối với đầu dò MS để tăng độ nhạy của phương pháp còn phương pháp HPLC định lượng ĐPĐQ của ATN kiểu pha đảo, thành phần pha động chứa các muối vô cơ không thể ghép nối với đầu dò MS.
Bảng 1.12. Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ của atenolol trong chế phẩm bằng phương pháp CE
Điều kiện điện di TLTK
- Cột mao quản silica nung chảy, chiều dài tổng cộng 50 cm, chiều dài hiệu dụng 45 cm, đường kính trong 50 μm. Nhiệt độ mao quản 25 oC.
- Kiểu tiêm mẫu 3 psi x 1 s. Hiệu điện thế 18 kV.
- Bước sóng phát hiện: 214 nm.
- Dung dịch điện di: Đệm phosphat – dung dịch triethanolamin 100 mM; pH 3,1; nồng độ CM-β-CD 7,8 mg/ml.
[195]
- Cột mao quản silica nung chảy, chiều dài tổng cộng 48,5 cm, chiều dài hiệu dụng 40 cm, đường kính trong 50 μm. Nhiệt độ mao quản: 20 oC - Kiểu tiêm mẫu: 50 mbar x 3 s. Hiệu điện thế: 24 kV.
- Bước sóng phát hiện: 214 nm.
- Dung dịch điện di: Tris 50 mM và CM-β-CD 8 mM, được điều chỉnh bằng acid phosphoric tới pH 4,0.
[201]
- Cột mao quản silica nung chảy, kích thước hạt 5 μm pha tĩnh liên kết với vancomycin. Nhiệt độ mao quản: 25 oC. Hiệu điện thế: 10 kV.
- Chế độ tiêm mẫu: 1 μL có chia dòng, tiêm mẫu áp suất hằng định.
- Bước sóng phát hiện: 230 nm.
- Dung dịch điện di: methanol – isopropanol – acetic acid – triethylamin tỷ lệ 70 : 30 : 0.05 : 0,05 (v/v/v/v)
[205]
Nhận xét:
- Phương pháp CE phân tích đồng phân đối quang ATN của Wei Wang [195], Wei Wang và cộng sự [201] sử dụng cột mao quản silica nung chảy thông thường còn tác nhân chọn lọc hoạt quang CM-β-CD được thêm vào dung dịch điện ly nền.
- Phương pháp của Zhongyi Chen và cộng sự [205] tác nhân chọn lọc hoạt quang là kháng sinh vancomycin được gắn cố định với pha tĩnh của cột mao quản.
- Các phương pháp CE được nêu trong Bảng 1.12, có thời gian di chuyển các ĐPĐQ của ATN khá dài (từ 20 phút đến hơn 40 phút) chưa phù hợp với công tác kiểm nghiệm thực tế, đồng thời độ phân giải giữa các đồng phân chưa cao (chỉ từ 1,3 đến 1,5) ảnh hưởng đến độ chính xác của phương pháp phân tích.