CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG HUYẾT TƯƠNG
3.2.3. Phân tích atenolol và đồng phân trong huyết tương NTN, bệnh nhân
3.2.3.3. Phân tích atenolol và các đồng phân trong huyết tương người tình nguyện
Nghiên cứu so sánh SKD được thiết kế theo mô hình nghiên cứu đơn liều, chéo 2 x 2. Trong mỗi nhóm, mỗi giai đoạn, NTN uống 1 viên thuốc thử hoặc 1 viên thuốc đối chứng theo trình tự sử dụng thuốc ngẫu nhiên hóa và ngược nhau ở hai giai đoạn.
Tiến hành cho NTN uống thuốc và lấy các mẫu máu. Các mẫu máu sau khi lấy được ly tâm tách HT, bảo quản lạnh ở -35 ±5 C cho tới khi tiến hành phân tích bằng phương pháp LC-MS/MS đã xây dựng. Đề cương nghiên cứu và phiếu cam kết tình nguyện tham gia đại diện NTN đính kèm ở phụ lục 6 của luận án.
Kết quả phân tích LC-MS/MS xác định nồng độ ATN và đồng phân trong các mẫu HT của NTN được trình bày ở các Bảng 3.39 đến Bảng 3.42. SKĐ phân tích mẫu HT một số NTN tại thời điểm trước và sau khi dùng thuốc được trình bày ở Hình 3.35 đến Hình 3.40.
122
Bảng 3.39. Nồng độ R-ATN và S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống thuốc Atenolol STADA 50mg T.gian (h)
N.độ (ng/ml) 0 1,0 1,5 1,75 2,0 2,25 2,5 2,75 3,0 4,0 6,0 8,0 12 24 NTN 1 R-ATN 0 124,1 122,1 128,2 143,9 156,6 148,1 149,2 138,8 119,0 105,0 75,0 37,7 9,4
S-ATN 0 116,0 110,0 117,3 131,9 145,6 142,0 142,4 129,7 112,7 100,7 70,5 36,4 9,7 NTN 2 R-ATN 0 65,3 115,8 111,0 138,6 154,2 166,7 252,5 175,6 162,8 152,4 120,7 55,8 11,2 S-ATN 0 58,3 103,4 100,1 129,8 149,7 170,2 250,0 172,8 161,1 147,6 109,8 50,7 10,7 NTN 3 R-ATN 0 58,7 111,2 125,7 140,3 149,6 162,9 146,7 134,5 114,8 101,4 72,5 44,4 8,7 S-ATN 0 56,8 108,7 122,3 136,5 152,2 164,8 144,7 139,0 112,7 97,6 69,3 41,6 8,3 NTN 4 R-ATN 0 31,7 65,8 88,1 126,5 136,7 121,8 101,1 95,7 75,8 62,4 44,1 22,5 6,5
S-ATN 0 29,0 67,3 90,2 124,1 133,8 120,2 99,5 93,7 71,6 63,2 42,4 21,3 7,1
NTN 5 R-ATN 0 110,7 116,8 106,8 101,3 132,6 123,8 108,2 109,0 105,4 103,5 96,7 48,5 13,0 S-ATN 0 103,7 107,6 100,1 118,7 124,0 102,1 99,5 97,4 95,1 94,9 89,7 45,5 12,8 NTN 6 R-ATN 0 184,9 254,6 254,3 253,4 240,0 213,8 222,1 190,5 165,4 117,2 72,7 35,3 6,9 S-ATN 0 184,5 248,6 248,5 242,4 225,2 196,6 205,1 174,6 150,3 104,1 63,6 31,6 6,1 Trung
bình
R-ATN 0 95,9 131,0 135,7 150,7 161,6 156,2 163,3 140,7 123,9 107,0 80,3 40,7 9,3 S-ATN 0 91,4 124,3 129,7 147,2 155,1 149,3 156,9 134,5 117,2 101,3 74,2 37,8 9,1 R,S-ATN* 0 187,3 255,3 265,4 297,9 316,7 305,5 320,2 275,2 241,1 208,3 154,5 78,5 18,4
SD R-ATN 0 50,6 58,4 54,7 48,1 36,1 31,0 56,0 33,6 31,6 26,5 23,7 10,6 2,3
S-ATN 0 51,0 57,5 54,2 42,9 32,8 31,7 54,7 32,0 30,6 24,7 21,1 9,6 2,3
(*) Nồng độ R,S-ATN bằng tổng nồng độ các đồng phân đối quang R-ATN và S-ATN
123
Bảng 3.40. Nồng độ R-ATN và S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống thuốc TENORMIN 50mg T.gian (h)
N.độ (ng/ml) 0 1,0 1,5 1,75 2,0 2,25 2,5 2,75 3,0 4,0 6,0 8,0 12 24 NTN 1 R-ATN 0 121,1 122,2 105,2 103,9 104,6 99,1 96,0 96,3 100,7 76,0 58,1 36,8 11,9
S-ATN 0 111,8 115,3 98,1 96,1 96,2 92,0 89,5 92,8 94,2 69,0 52,4 35,2 11,8
NTN 2 R-ATN 0 94,2 111,9 141,5 170,4 191,9 202,3 196,3 187,0 199,2 141,8 102,7 51,5 11,0 S-ATN 0 92,3 113,4 140,1 169,8 189,7 200,2 194,1 187,6 200,0 142,8 109,8 50,7 10,7 NTN 3 R-ATN 0 126,6 121,5 125,1 135,4 152,6 221,2 239,5 249,5 216,5 162,9 115,2 56,7 13,8 S-ATN 0 115,2 110,9 115,5 127,4 146,7 218,7 244,9 238,8 205,7 146,2 103,6 53,2 14,0 NTN 4 R-ATN 0 136,7 222,1 262,4 275,5 247,7 285,1 288,8 285,1 217,8 130,4 84,3 42,7 6,6 S-ATN 0 135,1 218,4 254,1 267,1 237,1 275,1 273,2 265,2 192,2 113,3 72,7 36,3 5,7 NTN 5 R-ATN 0 82,9 112,4 133,3 124,3 124,3 117,9 109,7 110,9 84,2 58,8 42,6 24,1 7,8 S-ATN 0 75,7 104,8 126,0 120,8 120,8 111,6 103,7 101,9 77,5 53,3 39,7 22,5 7,6 NTN 6 R-ATN 0 115,6 199,1 225,0 204,3 205,8 165,3 148,6 167,6 124,6 92,2 74,5 46,1 14,7 S-ATN 0 105,0 199,2 219,2 197,1 194,5 153,6 137,2 150,4 110,9 80,4 64,6 42,1 13,5 Trung
bình
R-ATN 0 113,0 148,0 165,4 169,0 171,1 181,8 179,8 182,7 157,2 110,4 79,5 43,0 11,0 S-ATN 0 105,8 143,7 158,8 163,1 164,2 175,2 173,8 172,8 146,8 100,8 73,8 40,0 10,6 R,S-ATN* 0 218,9 291,7 324,3 332,0 335,3 357,0 353,6 355,5 303,9 211,2 153,4 83,0 21,5
SD R-ATN 0 18,6 44,8 57,5 57,7 49,1 63,0 69,1 68,1 55,6 37,2 24,8 10,6 2,9
S-ATN 0 18,6 46,5 57,3 57,1 47,8 63,2 69,2 64,6 53,6 35,8 25,4 10,3 3,0
(*) Nồng độ R,S-ATN bằng tổng nồng độ các đồng phân đối quang R-ATN và S-ATN
124
Bảng 3.41. Nồng độ S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống các thuốc Atpure® 25 và viên nén S-Atenolol 25 mg T.gian (h)
N.độ (ng/ml) 0 1,0 1,5 1,75 2,0 2,25 2,5 2,75 3,0 4,0 6,0 8,0 12 24 Atpure® 25
NTN 7 0 102,8 181,2 191,2 207,3 207,3 200,6 198,5 177,8 135,0 86,8 74,9 47,4 16,1 NTN 8 0 251,0 306,7 305,0 349,6 295,7 279,6 280,4 253,1 173,3 109,9 86,6 48,3 13,8 NTN 9 0 133,7 109,9 142,6 139,3 163,6 170,3 173,2 191,4 198,7 123,1 81,9 49,9 16,7 NTN 10 0 146,8 189,2 191,6 199,4 185,4 174,2 164,2 168,3 140,5 107,1 56,9 38,7 9,0 NTN 11 0 124,7 204,0 182,7 156,4 165,2 212,2 251,3 249,1 198,5 126,2 89,8 49,4 13,4 NTN 12 0 97,2 125,6 180,3 205,6 287,6 326,5 300,0 259,3 210,4 138,3 90,7 59,6 15,1 Trung bình 0 142,7 186,1 198,9 209,6 217,5 227,2 227,9 216,5 176,1 115,2 80,1 48,9 14,0 SD 0 51,3 63,7 50,3 67,7 54,5 57,1 52,3 38,0 29,3 16,4 11,7 6,1 2,5
Viên nén S-Atenolol 25 mg
NTN 7 0 131,2 228,7 231,3 241,2 225,1 210,5 202,5 196,3 170,9 109,5 85,0 49,2 14,9 NTN 8 0 58,7 147,0 202,6 226,7 219,3 180,5 189,7 175,1 138,5 92,0 71,8 43,5 12,3 NTN 9 0 77,6 76,3 82,8 103,8 109,1 116,4 134,6 134,1 101,3 57,8 38,0 18,5 6,6 NTN 10 0 143,9 163,0 128,1 123,5 142,6 142,8 139,0 151,4 127,2 116,7 63,5 37,3 8,1 NTN 11 0 228,4 256,7 241,9 222,3 231,5 211,8 211,1 200,2 147,0 95,7 68,7 41,1 13,5 NTN 12 0 67,8 111,5 156,9 150,2 141,7 128,3 101,5 89,3 67,3 44,8 32,7 21,5 8,7 Trung bình 0 117,9 163,9 173,9 177,9 178,2 165,0 163,1 157,8 125,4 86,1 60,0 35,2 10,7 SD 0 58,7 62,6 56,9 54,1 48,5 38,1 40,3 38,5 33,3 26,2 18,6 11,3 3,0
125
Bảng 3.42. Nồng độ S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống các thuốc Atpure® 25 và Tenormin 50 mg T.gian (h)
N.độ (ng/ml) 0 1,0 1,5 1,75 2,0 2,25 2,5 2,75 3,0 4,0 6,0 8,0 12 24 Tenormin 50 (Atenolol racemic 50 mg)
NTN 13 0 78,8 96,3 101,2 142,4 118,6 111,1 97,1 88,5 72,6 51,3 41,1 22,9 10,9 NTN 14 0 66,5 121,8 145,4 171,6 199,2 210,4 221,6 211,3 199,5 182,8 160,0 101,2 16,4 NTN 15 0 96,6 178,6 202,2 190,7 160,2 141,8 121,9 102,4 88,3 62,0 32,7 21,4 6,2 NTN 16 0 101,5 125,6 153,7 166,1 171,4 177,9 182,5 183,4 169,8 158,3 110,4 47,2 18,8 NTN 17 0 66,8 92,5 118,2 128,3 144,6 125,3 112,5 92,7 80,2 62,5 41,4 20,8 8,4 NTN 18 0 101,2 229,6 190,1 170,5 161,7 148,9 132,6 108,8 97,6 79,9 51,8 28,3 10,5 Trung bình 0 85,2 140,7 151,8 161,6 159,3 152,6 144,7 131,2 118,0 99,5 72,9 40,3 11,9 SD 0 15,2 48,7 35,9 20,5 24,6 33,1 43,4 47,9 48,5 51,4 46,7 28,7 4,4
Atpure® 25 (S-Atenolol 25 mg)
NTN 13 0 101,7 199,1 250,8 211,4 196,5 180,7 155,6 131,4 105,8 90,0 71,6 35,3 12,1 NTN 14 0 150,6 199,9 223,7 278,4 260,1 244,4 220,0 201,5 167,3 133,9 93,3 58,9 15,7 NTN 15 0 127,7 189,9 223,6 270,8 289,8 294,6 310,3 280,7 245,6 199,8 160,5 102,3 26,5 NTN 16 0 98,5 112,8 202,7 189,6 170,5 140,4 118,6 96,4 81,3 60,0 42,4 21,2 6,8 NTN 17 0 130,6 330,8 298,4 250,4 228,8 201,6 170,3 144,7 118,6 101,2 80,6 51,8 14,0 NTN 18 0 88,2 133,5 178,5 180,6 200,8 205,5 202,4 190,0 182,1 122,2 77,8 42,0 11,1 Trung bình 0 116,2 194,3 229,6 230,2 224,4 211,2 196,2 174,1 150,1 117,9 87,7 51,9 14,4 SD 0 21,7 69,6 37,8 38,4 40,4 48,5 60,5 59,3 55,0 43,6 36,0 25,5 6,1
RT:0.00 - 6.80
0 2 4 6
Time (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80 100 0.15
0.61 1.87 3.51 4.81 5.65
0.35 1.87 3.51 4.81 5.65 2.26
0.15 0.61
1.04 4.48
1.98 3.55
5.04 5.88 NL:
6.92 TIC M S B L
NL:
6.13 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250]
M S B L
NL:
6.92 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250]
M S B L
RT:0.00 - 6.80
0 2 4 6
Time (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80
100 RT : 4.29
1.07 1.95 3.44 3.58 5.58
RT : 4.29
NL: 6.81E3 TIC M S Genesis 5-1-0
NL: 1.08E1 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250] M S 5-1-0
NL: 6.81E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250] M S Genesis 5-1-0
Hình 3.35. SKĐ mẫu HT trước khi uống thuốc (điểm 0 h) của NTN 01
Hình 3.36. SKĐ mẫu HT điểm 0 h của NTN 18 thêm nội chuẩn
RT:0.00 - 7.00
0 2 4 6
T ime (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80
100 3.70
5.89 4.34
0.55 2.30 RT : 3.70
RT: 5.89
RT : 4.34
NL: 1.03E4 TIC M S 2-1-2,25
NL: 1.03E4 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250] M S Genesis 2-1-2,25
NL: 4.20E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250] M S Genesis 2-1-2,25
RT:0.00 - 7.00
0 2 4 6
Time (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80
100 RT: 4.34
RT : 3.70 RT: 3.70
RT: 5.88
RT: 4.34
NL: 3.61E3 TIC M S Genesis 2-1-24
NL: 5.21E2 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250] M S Genesis 2-1-24
NL: 3.61E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250] M S Genesis 2-1-24
Hình 3.37. SKĐ mẫu HT của NTN 02 sau khi uống thuốc atenolol racemic 2,5 h (nồng độ R-, S-ATN khoảng 190 ng/ml)
Hình 3.38. SKĐ mẫu HT của NTN 02 sau khi uống thuốc atenolol racemic 24 h (nồng độ R-, S-ATN khoảng 11 ng/ml)
RT:0.00 - 7.00
0 2 4 6
T ime (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80
100 5.87
4.37
3.70 0.16 2.06
RT: 5.87
RT: 4.37
NL: 7.17E3 TIC M S 8-2-2,75
NL: 7.17E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250] M S Genesis 8-2-2,75
NL: 6.24E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250] M S Genesis 8-2-2,75
RT:0.00 - 7.00
0 2 4 6
Time (min) 0
20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
Relative Abundance
0 20 40 60 80
100 4.39
3.71 5.88 1.97 0.62
RT: 5.88
RT: 4.39
NL: 7.61E3 TIC M S 8-1-24
NL: 5.65E2 TIC F: + c ESI SRM ms2 267.000 [189.750-190.250] M S Genesis 8-1-24
NL: 7.61E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 346.100 [197.750-198.250] M S Genesis 8-1-24
Hình 3.39. SKĐ mẫu của NTN 08 sau khi uống viên nén S-Atenolol 2 giờ (nồng độ S-ATN: 175,1 ng/ml)
Hình 3.40. SKĐ mẫu HT của NTN 08 sau khi uống viên nén S-Atenolol 24 giờ
(nồng độ S-ATN: 12,3 ng/ml) Trên SKĐ các mẫu huyết tương NTN sử dụng thuốc ATN racemic xác định được cả hai đồng phân đối quang R-ATN và S-ATN. Trong khi đó, SKĐ các mẫu huyết tương NTN sử dụng thuốc S-ATN chỉ xuất hiện pic S-ATN không có pic đồng phân đối quang R-ATN.
Kết quả phân tích hơn 500 mẫu HT của 18 NTN tham gia nghiên cứu khảo sát SKD một số chế phẩm thuốc ATN cho thấy, phương pháp LC-MS/MS đã xây dựng thích hợp để xác định nồng độ ATN toàn phần cũng như nồng độ các ĐPĐQ của ATN trong HT người.
Từ kết quả xác định nồng độ ATN và các ĐPĐQ trong HT, tiến hành xác định các thông số DĐH của từng thuốc trên NTN và đường cong nồng độ thuốc – thời gian của NTN sau khi uống các thuốc ATN racemic và S-ATN theo các nội dung trình bày trong phần phương pháp nghiên cứu (Mục 2.3.2.3a).
Kết quả xác định các thông số DĐH của các thuốc ATN được trình bày ở Bảng 3.43. Đường cong nồng độ - thời gian của các thuốc được trình bày ở Hình 3.41 và Hình 3.42.
Bảng 3.43. Thông số DĐH trung bình của một số thuốc ATN trên NTN Việt Nam Thông số
Thuốc
Cmax
(ng/ml)
Tmax
(h)
AUC0-t
(ng.ml-1.h)
AUC0-∞
(ng.ml-1.h)
T1/2
(h) Tenormin 50mg (trung bình SD, n = 12)
R-ATN 196,4 ± 51,3 2,17 ± 0,53 1478,0 ± 554,0 1559,8 ± 567,2 5,34 ± 0,71 S-ATN 192,0 ± 50,4 2,15 ± 0,51 1428,0 ± 534,6 1541,1 ± 553,8 5,39 ± 0,83 R,S-ATN* 388,4 ± 101,6 2,16 ± 0,51 2905,3 ± 1086,3 3137,0 ± 1118,4 5,37 ± 0,76 Atenolol – STADA 50mg (trung bình SD, n = 6)
R-ATN 182,7 ± 56,1 2,25 ± 0,42 1422,8 ± 339,7 1495,1 ± 348,3 5,25 ± 0,85 S-ATN 177,8 ± 57,0 2,25 ± 0,42 1342,5 ± 302,7 1414,8 ± 307,8 5,31 ± 0,99 R,S-ATN* 360,5 ± 113,0 2,25 ± 0,42 2765,3 ± 642,0 2909,9 ± 655,7 5,28 ± 0,92 Atpure® 25mg (trung bình SD, n = 12)
S-ATN 259,3 ± 58,0 2,31 ± 0,67 1779,9 ± 472,9 1906,1 ± 514,0 5,24 ± 0,49 Viên nén S-Atenolol 25mg (trung bình SD, n = 6)
S-ATN 196,5 ± 51,1 1,92 ± 0,47 1348,7 ± 409,6 1429,2 ± 432,6 5,19 ± 0,22
*Ghi chú: Cmax, AUC của R,S-ATN là tổng các giá trị tương ứng của R- và S-ATN;
Tmax, T1/2 của R,S-ATN bằng trung bình các giá trị tương ứng của R- và S-ATN.
Hình 3.41. Đường cong trung bình nồng độ S-Atenolol – thời gian của các chế phẩm thuốc trên người tình nguyện Việt Nam
Hình 3.42. Đường cong trung bình nồng độ R,S-Atenolol – thời gian Kết quả thống kê cho thấy:
+ Các đồng phân đối quang S-ATN và R-ATN có tốc độ và mức độ hấp thu tương tự nhau. Các thông số Tmax và T1/2 của S-ATN trong các chế phẩm đơn đồng phân và các chế phẩm racemic tương tự nhau. Hai thuốc racemic (Ternomin 50 mg và Atenolol Stada 50 mg) có SKD tương đương nhau, các thông số DĐH (Cmax, Tmax, AUC và Tmax) của các đồng phân đối quang S-ATN, R-ATN và ATN toàn phần không có sự khác biệt. Hai thuốc S-ATN có các thông số Tmax và T1/2 tương đương nhau, nhưng các giá trị Cmax và AUC không tương đương nhau (Bảng 3.43).
+ Các đường cong trung bình nồng độ R-ATN, S-ATN và R,S-ATN theo thời gian (Hình 3.40 và Hình 3.41) có pha hấp thu và pha thải trừ tương tự nhau. Đường cong nồng độ S-ATN theo thời gian của hai thuốc S-ATN không giống nhau (Hình 3.41).
Đường cong nồng độ S-ATN theo thời gian của thuốc đơn đồng phân Atpure có sự khác biệt so với các đường cong nồng độ S-ATN theo thời gian của các thuốc ATN racemic (Hình 3.41). Đường cong trung bình nồng độ ATN toàn phần theo thời gian của hai thuốc racemic tương tự nhau (Hình 3.42).