CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG CHẾ PHẨM
3.1.3. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong chế phẩm
3.1.3.1. Định lượng atenolol và các đồng phân trong một số thuốc
Tiến hành phân tích xác định hàm lượng S-ATN và R-ATN trong mẫu thuốc thử ATN racemic (Atenolol Stada 50mg) bằng các phương pháp HPLC, CE đã được nghiên cứu xây dựng và thẩm định ở trên.
Xác định hàm lượng ATN toàn phần trong mẫu thuốc dựa trên kết quả xác định các ĐPĐQ (hàm lượng ATN toàn phần bằng tổng hàm lượng các đồng phân S-ATN và R-ATN).
Đồng thời tiến hành phân tích xác định hàm lượng ATN toàn phần trong mẫu thuốc bằng phương pháp HPLC ghi trong Dược điển Mỹ 38 [186].
Phân tích thống kê, so sánh kết quả định lượng ATN toàn phần, S-ATN và R-ATN của các phương pháp phân tích ĐPĐQ. Đồng thời phân tích phương sai, so sánh kết quả định lượng ATN toàn phần của các phương pháp HPLC, CE nghiên cứu trong luận án và phương pháp HPLC của Dược điển.
Kết quả phân tích HPLC, CE xác định hàm lượng ATN và các ĐPĐQ trong mẫu thử được trình bày ở Bảng 3.11.
Kết quả phân tích thống kê t-test, F-test so sánh hàm lượng ATN và các ĐPĐQ xác định bằng phương pháp HPLC, CE nghiên cứu trong luận án được trình bày ở Bảng 3.12.
Kết quả phân tích phương sai so sánh lượng lượng ATN toàn phần trong mẫu thử xác định bằng các phương pháp HPLC, CE nghiên cứu trong luận án và phương pháp HPLC của Dược điển Mỹ 38 được trình bày ở Bảng 3.13.
Bảng 3.11. Kết quả định lượng atenolol và đồng phân đối quang trong mẫu thử Số thứ tự S-ATN (mg/viên) R-ATN (mg/viên) ATN toàn phần (mg/viên)
HPLC CE HPLC CE HPLC CE USP 38
1 24,2 24,5 24,3 25,3 48,5 49,8 50,4
2 24,9 24,9 24,9 25,6 49,8 50,6 49,3
3 23,9 24,8 24,2 25,7 48,1 50,5 49,5
4 24,4 24,1 24,8 25,1 49,2 49,2 49,6
5 24,5 23,8 24,9 24,2 49,4 48,0 50,2
6 24,6 24,2 24,4 24,5 49,1 48,7 49,0
Trung bình (mg) 24,4 24,4 24,6 25,1 49,0 49,5 49,7
RSD (%) 1,4 1,8 1,3 2,4 1,3 2,0 1,1
Bảng 3.12. So sánh độ chính xác của hai phương pháp HPLC, CE định lượng ATN và các ĐPĐQ trong chế phẩm
Thống kê S-ATN (mg/viên) R-ATN (mg/viên) R,S-ATN (mg/viên) HPLC CE HPLC CE HPLC CE
Trung bình (mg) 24,4 24,4 24,6 25,1 49,0 49,5
SD 0,35 0,43 0,31 0,60 0,62 1,01
S2 0,12 0,18 0,10 0,36 0,39 1,03
S2 chung 0,3929 0,4802 0,8401
Test F p = 0,32 p = 0,09 p = 0,15
Test t p = 0,74 p = 0,26 p = 0,61
Bảng 3.13. Phân tích ANOVA kết quả định lượng ATN toàn phần trong chế phẩm của
các phương pháp
Nguồn biến thiên
Tổng bình phương
Bậc tự do
Trung bình bình phương
F thực nghiệm
Giá trị p
F lý thuyết
Giữa các PP* 0,4736 2 0,2368 0,38 0,69 3,89
Trong cùng PP* 7,4180 12 0,6182
Tổng 7,8916 14
(*): Phương pháp Kết quả thống kê ở Bảng 3.12 cho thấy, hàm lượng trung bình của ATN và các ĐPĐQ trong mẫu thuốc xác định bằng các phương pháp HPLC, CE khác nhau không có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy trên 95% (p > 0,05). Phương sai của hai phương pháp HPLC và CE cũng khác nhau không có ý nghĩa thống kê với mức mức độ tin cậy trên 95% (p > 0,05). Các phương pháp HPLC và CE định lượng ATN và các ĐPĐQ trong mẫu thử có độ đúng, chính xác tương đương nhau.
Kết quả phân tích phương sai ở Bảng 3.13 với giá trị p = 0,69 > 0,05 cho thấy, tập hợp các giá trị hàm lượng ATN toàn phần xác định bằng các phương pháp HPLC, CE nghiên cứu trong luận án và bằng phương pháp HPLC định lượng ATN toàn phần của Dược điển Mỹ 38 là đồng nhất. Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy trên 95% về kết quả định lượng ATN toàn phần bằng các phương pháp.
Như vậy, phương pháp HPLC và phương pháp CE định lượng ATN và các ĐPĐQ nghiên cứu trong luận án có độ đúng, độ chính xác tương đương nhau. Các phương pháp đều có thể áp dụng để định lượng đồng thời ATN và các ĐPĐQ trong chế phẩm thuốc.
b. Định lượng atenolol và các đồng phân trong một số chế phẩm thuốc
Tiến hành phân tích xác định hàm lượng S-ATN, R-ATN và R,S-ATN trong 08 mẫu thuốc (04 mẫu racemic và 04 mẫu S-ATN) bằng các phương pháp HPLC, CE đã được nghiên cứu xây dựng và thẩm định ở trên.
Mỗi mẫu phân tích từ 3–6 lần, xác định hàm lượng hoạt chất có trong mẫu dựa vào các mẫu chuẩn phân tích song song trong cùng điều kiện.
Kết quả định lượng ATN và ĐPDQ trong một số chế phẩm thuốc được trình bày ở Bảng 3.14.
87
Bảng 3.14. Kết quả xác định hàm lượng atenolol trong một số chế phẩm thuốc bằng các phương pháp HPLC, CE STT
Chế phẩm
(hàm lượng ghi nhãn);
số lần phân tích
Hàm lượng trung bình (mg/viên) ± SD Hàm lượng so nhãn (%) Phương pháp HPLC Phương pháp CE Phương
pháp HPLC
Phương pháp CE R-ATN S-ATN ATN* R-ATN S-ATN ATN*
1 Atenolol STADA
(Atenolol 50 mg); n = 6 24,6 ± 0,3 24,4 ± 0,4 49,0 ± 0,6 25,1 ± 0,7 24,4 ± 0,5 49,5 ± 1,1 98,0 ± 1,3 98,9 ± 2,2
(RSD = 1,3%) (RSD = 2,3%)
2 Tenormin 50
(Atenolol 50 mg); n = 6 24,8 ± 0,3 24,8 ± 0,2 49,6 ± 0,4 25,3 ± 0,6 24,5 ± 0,4 49,9 ± 0,8 99,3 ± 0,8 99,7 ± 1,7
(RSD = 0,8%) (RSD = 1,7%)
3 Tenorca 50
(Atenolol 50 mg); n = 3 23,7 ± 0,1 23,7 ± 0,1 47,4 ± 0,2 23,8 ± 0,4 23,3 ± 0,4 47,1 ± 0,8 94,8 ± 0,5 94,2 ± 1,6
(RSD = 0,5%) (RSD = 1,7%)
4 Teginol 50
(Atenolol 50 mg); n = 3
23,2 ± 0,3 23,1 ± 0,4 46,3 ± 0,8 23,5 ± 0,6 22,4 ± 0,5 45,8 ± 1,1 92,5 ± 1,6 91,7 ± 2,2
(RSD = 1,7%) (RSD = 2,4%)
5 Atpure®-50
(S-atenolol 50 mg); n = 3 + 49,6 ± 0,2 - ND 49,9 ± 0,6 - 99,2 ± 0,4 99,8 ± 1,2
(RSD = 0,4%) (RSD = 1,2%)
6 Atpure®-25
(S-atenolol 25 mg); n = 6 + 24,4 ± 0,2 - ND 24,5 ± 0,4 - 97,6 ± 0,7 98,1 ± 1,5
(RSD = 0,8%) (RSD = 1,5%)
7 Atpure®-12,5
(S-atenolol 12,5 mg); n = 3 + 12,5 ± 0,1 - ND 12,5 ± 0,3 - 100,2 ± 0,9 100,3 ± 2,2
(RSD = 0,9%) (RSD = 2,2%)
8 Viên nén S-atenolol 25 mg
(S-atenolol 25 mg); n = 3 + 23,9 ± 0,3 - ND 23,4 ± 0,3 - 95,5 ± 1,3 95,8 ± 1,9
(RSD = 1,4%) (RSD = 1,9%) (*) Hàm lượng ATN bằng tổng hàm lượng các đồng phân R-ATN và S-ATN. ND: Không xác định được. (+): Nồng độ > LOQ. (-): Không xác định.