CHƯƠNG 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.4. Sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa và ức chế enzyme tyrosinase
2.4.4. Sàng lọc hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase
❖ Nguyên tắc
L-tyrosine được sử dụng làm cơ chất trong thử nghiệm thử hoạt tính ức chế sự hoạt động của enzym tyrosinase. Enzyme tyrosinase sẽ chuyển hóa L-tyrosine thành dopachrome có màu đỏ cam và có độ hấp thu cực đại tại bước sóng λmax = 475nm (Jae Kyung No,1999). Các mẫu khảo sát hoạt tính ức chế khi cho vào dung dịch đo quang sẽ làm giảm hoạt tính xúc tác của enzyme tyrosinase. Khi đó q trình chuyển hóa L-tyrosine thành dopachrome cũng sẽ giảm dẫn đến cường độ màu sẽ bị giảm đi (Đặng Hồng Phú, 2019).
❖ Quy trình thực hiện
Hoạt tính tyrosinase được xác định dựa trên phương pháp trắc quang để đo mật độ quang của enzyme tyrosinase. Phần trăm ức chế được tính như sau:
𝐏𝐡ầ𝐧 𝐭𝐫ă𝐦 ứ𝐜 𝐜𝐡ế (%) =𝐀 − 𝐁
𝐀 𝐱𝟏𝟎𝟎 (2.4)
Trong đó:
A – Hoạt tính PPO của mẫu đối chứng B – Hoạt tính PPO trong dịch chiết
Acid kojic được sử dụng như chất đối chứng dương.
❖ IC50
IC50 được định nghĩa là nồng độ của mẫu mà tại đó 50% hoạt tính của PPO bị ức chế. Giá trị IC50 (µg/ml) được tính tốn dựa vào phần trăm ức chế tương ứng. Từ giá trị phần trăm ức chế PPO tương ứng với mỗi nồng độ cao trích/ chất chuẩn đã tìm được ở trên, ta
34
dựng một đồ thị tương quan giữa phần trăm ức chế và nồng độ cao trích/ chất chuẩn. Từ đó tìm được giá trị IC50 (µg/ml) cho mỗi cao trích.
❖ Địa điểm thực hiện:
Mẫu được gửi phân tích tại Phịng thí nghiệm Nghiên cứu và Phát triển Hóa dược, Trung tâm nghiên cứu và chuyển giao công nghệ thuộc Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam.