khơng xâm lấn
Các kỹ thuật sàng lọc chẩn đốn trƣớc sinh ở Việt Nam đƣợc thực hiện tại một số cơ sở khoa học mới chỉ dừng lại ở một số phƣơng pháp nhƣ: xét nghiệm máu mẹ để định lƣợng nồng độ AFP, β-hCG, uE3, phục vụ chủ yếu cho sàng lọc trƣớc sinh; siêu âm thai phát hiện dị tật; chọc ối để nuôi cấy tế bào ối và phân tích di truyền tế bào của tế bào ối nuôi cấy đƣợc. Việc nghiên cứu chẩn đốn bằng phƣơng pháp khơng xâm lấn chƣa đƣợc đầu tƣ quan tâm. Tại Học viện Quân y, mặc dù đã thu đƣợc những kết quả bƣớc đầu trong lĩnh vực áp dụng phƣơng pháp không can thiệt trong sàng lọc và chẩn đoán trƣớc sinh, song lĩnh vực này cần tiếp tục đƣợc đầu tƣ, nghiên cứu và phát triển. Phƣơng pháp phân lập tế bào phôi từ máu ngoại vi mẹ áp dụng cho chẩn đốn trƣớc sinh ở Việt Nam cịn rất hạn chế. Vấn đề có tính quyết định trong chẩn đốn trƣớc sinh bằng biện pháp khơng xâm lấn là phải tách chiết đƣợc ADN phôi thai và tế bào phôi thai trong máu mẹ và sử dụng chúng để phân tích di truyền.
Nồng độ ADN phôi thai và tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi mẹ biến thiên theo tuổi thai, sự bất đồng nhóm máu giữa mẹ và thai nhi… Việc nghiên cứu tách chiết ADN phôi thai và tế bào phôi thai trong máu ngoại vi mẹ ở Việt Nam vẫn chƣa ở đâu tiến hành do vậy nghiên cứu này có ý nghĩa đặc biệt quan trọng trong việc xác định thời điểm thích hợp để chẩn đốn trƣớc sinh.
Đặc biệt, tại Việt Nam hiện nay chƣa có cơ sở lâm sàng, phịng nghiên cứu nào khác triển khai ứng dụng kỹ thuật chẩn đốn trƣớc sinh bằng biện pháp khơng
xâm lấn qua phân tích di truyền ADN phôi thai tự do hay tế bào phôi thai lƣu hành trong máu mẹ. Đây thực sự vẫn cịn là điểm nóng trong lĩnh vực chẩn đốn trƣớc sinh đối với cả thế giới cũng nhƣ ở Việt Nam.
Tại Việt Nam, dân số đông, tỷ lệ phụ nữ ở độ tuổi sinh đẻ cao. Việt Nam là một nƣớc đã trải qua nhiều cuộc chiến tranh, nhiều vùng trên đất nƣớc chịu ảnh hƣởng của chất độc dioxin. Do vậy, tỷ lệ trẻ bị DTBS ở các khu vực đó tƣơng đối cao. Ngồi ra với xu thế hiện nay kết hôn muộn và sinh con muộn nên các bà mẹ này cũng có nguy cơ sinh con bị dị tật cao hơn bình thƣờng. Điều này đặt ra nhu cầu rất cần thiết phải có các phƣơng pháp chẩn đốn nhanh và chính xác, góp phần giảm gánh nặng cho gia đình và cả xã hội.
Việc sàng lọc và chẩn đốn bằng phƣơng pháp khơng xâm lấn dựa trên ADN và tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi của mẹ sẽ mang lại hiệu quả lớn trong lĩnh vực chẩn đốn di truyền trƣớc sinh, góp phần giảm thiểu tai biến so với các phƣơng pháp xâm lấn.
Để góp phần nâng cao tính đặc hiệu của phƣơng pháp chẩn đốn khơng xâm lấn và giảm thiểu nguy cơ thai chết lƣu, sẩy thai, rị ối, góp phần chẩn đốn sớm và nhanh, giảm gánh nặng về tâm lý cho gia đình và xã hội do vậy chúng tơi thực hiện đề tài “Nghiên cứu tách chiết, phân tích ADN và tế bào phơi thai tự do trong máu ngoại vi mẹ để chẩn đốn trƣớc sinh”.
Để tách chiết đƣợc ADN phơi thai tự do lƣu hành trong máu ngoại vi của mẹ trong nghiên cứu này chúng tơi sử dụng bộ kít Mini Blood kit của Qiagen có cải tiến. Đối với ADN phôi thai tự do sau khi tách đƣợc chúng tôi chỉ sử dụng để sàng lọc các bệnh di truyền liên kết với giới tính và bệnh tăng sản thƣợng thận bẩm sinh hoặc sử dụng để chẩn đốn bất đồng nhóm máu giữa mẹ và thai nhi trong các trƣờng hợp ngƣời mẹ mang nhóm máu Rh âm.
Ngồi ra, trong nghiên cứu này chúng tôi cũng tiến hành tách phân lập tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi của mẹ đề chẩn đoán di truyền trƣớc sinh. Để tách đƣợc các tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi của mẹ chúng tôi dựa trên
việc sử dụng kỹ thuật FACS có cải tiến dùng kháng thể đơn dịng CD71 đã biotin hóa và sử dụng hạt từ tính đã đƣợc bao bọc 1 lớp Streptavidin. Mối liên kết giữa Streptavidin và biotin là một liên kết rất chặt bền, kháng thể sẽ đƣợc gắn với tế bào phôi thai và gắn với hạt từ, sau đó hạt từ này đƣợc gắn với giá từ tính, các phần khơng gắn trên giá từ tính sẽ đƣợc loại bỏ. Sau một vài lần tinh sạch chúng tôi thu đƣợc tế bào phôi thai. Các tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi của mẹ sau khi đƣợc tách sẽ đƣợc chứng minh và chẩn đoán bất thƣờng nhiễm sắc thể bằng kỹ thuật lai tại chỗ huỳnh quang FISH (sử dụng bộ kit của Vysis) và một vài tế bào sẽ đƣợc hút ra và nhân khuếch đại bộ gen bằng bộ kít Repli-G Single Cell của Qiagen để có thể chẩn đốn di truyền bằng các kỹ thuật PCR.