1 giờ sau sinh 2 giờ sau sinh 3 giờ sau sinh
3.3.4. Thử nghiệm ứng dụng tế bào phôi thai trong máu ngoại vi của mẹ để chẩn đoán bất thƣờng số lƣợng nhiễm sắc thể
đoán bất thƣờng số lƣợng nhiễm sắc thể
Mẫu DT01 chúng tôi phân lập tế bào khi thai ở 16 tuần tuổi, trƣờng hợp này vừa đƣợc chẩn đoán bằng kỹ thuật FISH vừa đƣợc chẩn đoán bằng kỹ thuật QF-PCR sau khi chọc ối.
Nhận xét: Hình ảnh kết quả nhuộm FISH cho mẫu DT01 ở trên cho thấy các tín hiệu huỳnh quang bắt màu tốt. Với NST số 21 xuất hiện 3 tín hiệu màu xanh lá cây, các NST thƣờng khác nhƣ NST số 13 và 18 đều xuất hiện 2 tín hiệu chứng tỏ NST này bình thƣờng. Hai NST giới tính xuất hiện 1 tín hiệu màu vàng của NST giới tính Y và một tín hiệu màu xanh rêu của NST X. Do vậy, đây là một tế bào mang bộ nhiễm sắc thể 47,XY,+21. Kết quả này đƣợc kiểm chứng bằng phƣơng pháp chẩn đoán QF-PCR qua mẫu ối của thai phụ và cho kết quả hoàn toàn phù hợp.
Dƣới đây là hình ảnh chẩn đốn mẫu ối này bằng kỹ thuật QF-PCR:
Kết quả hình ảnh điện di mao quản của mẫu DT01 trên chúng tơi nhận thấy trong hình ảnh có xuất hiện locus gen SRY, các locus khác trên NST X, số 13, số 18 xuất hiện các alen với tỷ lệ 1:1 bình thƣờng, riêng các locus của NST số 21 xuất hiện các alen với tỷ lệ 1:2; 2:1 (đánh dấu vịng trịn) nhƣ trên hình 3.29. Do vậy có thể kết luận rằng tế bào phơi này mang hội chứng Down (trisomy 21).
Bảng 3.17. Kết quả thử nghiệm trên các tế bào phôi thai tự do
STT Mã Mã bệnh nhân Tuổi thai (tuần) Vysis MultiVysion PGT Extra marker XY SRY qua ADN tự do QF-PCR (chọc ối) Kiểm tra sau sinh 1 831 8 46,XY + + Không làm + 2 837 7+6 46,XY + + Không làm + 3 964 9+2 46,XY + + Không làm + 4 DT01 20 47,XY,+21 + + 47,XY,+21 -
Trong nghiên cứu này chúng tôi thử nghiệm thành công trên 4 mẫu nghiên cứu: mẫu số 831, 837, 964, vừa đƣợc tách ADN phôi thai tự do và phân lập tế bào phôi thai tự do. Kết quả nhân gen SRY của cả 4 mẫu đều cho kết quả dƣơng tính với gen SRY. Các tế bào phân lập đƣợc từ các mẫu nghiên cứu có mẫu DT01, 831 và 837 là thực hiện nhuộm FISH bằng bộ kít Vysis MultiVysion PGT và cho kết quả mẫu 831 và 837 đều có bộ NST 46,XY. Mẫu DT01 có bộ NST 47,XY,+21. Mẫu DT01 cũng đã đƣợc kiểm chứng bằng chọc ối chẩn đoán bằng bộ Kít Aneufast cho 5 nhiễm sắc thể 13, 18, 21 và XY.
Mẫu số 964 các tế bào phôi đƣợc phân lập tiến hành nhân khuếch đại của nhiễm sắc thể X và Y bằng bộ Kít Extra marker của Aneufast kit. Kết quả cho thấy mẫu này xuất hiện locus gen SRY dƣơng tính điều đó cho thấy việc phân lập thành công tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi của mẹ. Các mẫu 831, 837 đƣợc kiểm
tra sau sinh và cho kết quả hoàn tồn chính xác là những đứa trẻ sinh ra bình thƣờng không mắc các hội chứng liên quan đến bất thƣờng NST 13, 18, 21 và X, Y. Nhƣ vậy, trong nghiên cứu này chúng tôi đã bƣớc đầu ứng dụng thành công tế bào phôi thai tự do trong máu ngoại vi để chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể thƣờng gặp, kết quả của 4 mẫu phù hợp với chẩn đoán bằng QF-PCR từ dịch ối và sau sinh.