Sau khi được chẩn đoán lâm sàng là VMNNNS tất cả bệnh nhân đều được chọc tiền phòng và dịch kính lấy bệnh phẩm. Những bệnh nhân có chỉ định cắt dịch kính cấp cứu sẽ lấy bệnh phẩm qua đường cắt dịch kính (Sau khi mở củng mạc, đưa đầu cắt vào nội nhãn, cắt và hút 0,2 đến 0,5 ml bệnh phẩm trước khi mở đường nước).
Bệnh phẩm sau khi lấy được sẽ cho soi tươi, nhuộm Gram để xác định sơ bộ loại tác nhân gây bệnh và nuôi cấy vào các môi trường thích hợp. Các bệnh phẩm nhuộm Gram có hình ảnh của vi khuẩn sẽ được lựa chọn vào nghiên cứu và các tác nhân không phải vi khuẩn sẽ được loại ra khỏi nghiên cứu. Tất cả các bệnh phẩm nhuộm soi dương tính được nuôi cấy phân lập để xác định các căn nguyên gây bệnh. Nuôi cấy tìm các căn nguyên vi khuẩn hiếu khí được tiến hành tại phòng xét nghiệm vi sinh, Bệnh viện Mắt Trung ương. Nuôi cấy tìm căn nguyên kị khí được tiến hành xét nghiệm tại khoa Vi sinh, Bệnh viện Việt Đức.
Nuôi cấy sau 24h nếu không thấy khuẩn lạc mọc, để thêm 24 giờ tiếp. Nếu sau 48 h không thấy khuẩn lạc mọc, trả lời kết quả nuôi cấy âm tính. Nếu khuẩn lạc mọc sau 24h, hoặc 48h thì cần quan sát đặc điểm khuẩn lạc, nhuộm Gram để quan sát hình thái, bắt mầu, sắp xếp của vi khuẩn. Tác nhân gây
bệnh sau đó được định danh bằng các tính chất sinh vật hóa học tùy theo đặc điểm khuẩn lạc và hình ảnh vi khuẩn quan sát được và làm kháng sinh đồ bằng phương pháp khoanh giấy khuếch tán
Sơ đồ 2.1. Qui trình xét nghiệm vi sinh
Cầu khuẩn Gr (+) Trực khuẩn Gr (-)
Tác nhân gây bệnh sau được định danh bằng các tính chất sinh vật hóa học
Bệnh phẩm sau khi lấy theo phương pháp vô khuẩn sẽ được chuyển đến ngay phòng xét nghiệm vi sinh
Soi tươi và nhuộm Gram Nuôi cấy kị khí tại bệnh
viện Việt Đức Nuôi cấy phân lập tại khoa vi sinh bệnh viện Mắt
Trung Ương: thạch máu, thạch chocolate (35-37oC/ 5-10% CO2), Mac Conkey (35-37oC)
Sau 48 giờ nếu không có khuẩn lạc mọc → ÂM
TÍNH
Nếu có khuẩn lạc mọc →nhuộm Gram lại để quan sát hình thể, tính chất bắt mầu, cách sắp xếp của vi
khuẩn đồng thời quan sát đặc điểm khuẩn lạc
Trực khuẩn Gr (+)
Làm kháng sinh đồ bằng phương pháp khoanh giấy khuyếch tán
Tất cả bệnh nhân đều được cấy máu (nếu có sốt) và nước tiểu để tìm kiếm tác nhân gây bệnh toàn thân.