C, 5% CO2 Môi trường được thay mới 2 ngày một lần.
2.1.3. Định danh tế bào gốc trung mô thu nhận từ mô mỡ người Cơ sở khoa học:
Cơ sở khoa học:
Chưa có marker đặc hiệu của quần thể MSC trong mô mỡ, tuy nhiên, các tế bào này đã được xác định bằng sự hiện diện của một số marker bề mặt tế bào cũng như khơng biểu hiện của một số marker. Vẫn cịn một số tranh cải trong y văn liên quan đến các marker cần để xác định cho quần thể MSC ứng viên trong mơ mỡ. Tuy nhiên, đã có một sự thống nhất được chấp thuận bởi International Society for Cellular Therapy (ISCT) đưa ra các tiêu chí tối thiểu để sử dụng khi xác định các quần thể tế bào này [15].
28
Thứ nhất, đó là các tế bào bám dính vào chai ni khi tiến hành ni cấy.
Thứ hai, chúng không biểu hiện các marker của các tế bào tạo máu như CD11b, CD14, CD34, CD45, B-lymphocyte antigens CD19 và CD79a và HLA-DR nhưng biểu hiện được các marker như CD73, CD90 và CD105 (endoglin).
Thứ ba, chúng có khả năng biệt hóa thành các tế bào của dịng trung mơ như là tế bào sụn, tế bào mỡ và tế bào xương.
Phương pháp tiến hành:
Các tế bào được nuôi cấy tại thế hệ thứ 3 (P3), sẽ được sử dụng để nhuộm giemsa nhằm đánh giá khả năng bám dính vào bề mặt chai ni.
Các tế bào này cũng sẽ được sử dụng để đánh giá sự biểu hiện của một số marker bề mặt bằng kỹ thuật Flow Cytometry bằng máy BD.FACS Canto II (2-laser, 6-color).
Các tế bào tại thế hệ này cũng được sử dụng để cảm ứng biệt hóa thành các dịng tế bào xương, sụn và mỡ.
Chỉ tiêu đánh giá:
Các tế bào bám dính vào bề mặt chai ni
Các tế bào biểu hiện được dương tính với các marker CD13, CD44, CD73, CD90, CD105 và CD166 vàâm tính với các marker CD14, CD45 và HLA-DR bằng kỹ thuật Flow Cytometry.
Các tế bào biệt hóa được thành các dòng tế bào xương, sụn và mỡ.
2.2. NỘI DUNG 2: