C, 5% CO2 Vì khung G-A có cấu trúc lỗ xốp nên các tế bào sau khi được chuyển lên khung và nuôi trong mơi trường phù hợp sẽ di cư, bám dính và
TỪ TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ VÀ KHUNG NÂNG ĐỠ
3.3.2.1. Kết quả đánh giá sự tăng trưởng của tế bào gốc trung mô trong khung Fibrin
3.3.2.1. Kết quả đánh giá sự tăng trưởng của tế bào gốc trung mô trong khung Fibrin Fibrin
Kết quả sự tăng trưởng của tế bào gốc trung mô từ mô mỡ người (Human Adipose- derived Stem cells - hADSC) trên khung fibrin thông qua đánh giá bằng phương pháp MTT đươc trình bày trong Bảng 3.8 và đồ thị 3.6
69
Bảng 3.10. Kết quả đánh giá sự tăng trưởng của hADSC trên khung fibrin bằng MTT
Ngày
Mật độ quang
Mẫu tế bào trên khung fibrin Mẫu tế bào trên chai nuôi (mẫu chứng) 2 0,054a 0,004 0,050a 0,003 4 0,055a 0,002 0,055a 0,009 6 0,065a 0,002 0,054a 0,003 8 0,095b 0,001 0,059b 0,006 10 0,103b 0,001 0,064b 0,007 12 0,137c 0,006 0,107c 0,003
Ghi chú: a,b,c – chỉ sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.
Từ số liệu nghiên cứu trong bảng 3.7, sự tăng trưởng của hADSC trong khung fibrin và mẫu chứng (hADSC nuôi trong chai cấy) được trình bày bằng đồ thị 3.6 như sau:
Đồ thị 3.6: Đường cong tăng trưởng của hADSC trên khung fibrin và trên đĩa nuôi qua
kết quả đo mật độ quang ở bước song 546 nm
Từ đồ thị 3.6 cho thấy giá trị mật độ quang của dung dịch hòa tan tinh thể ở hai mẫu tế bào được nuôi trong khung fibrin và nuôi trên đĩa đều tăng lên theo thời gian mỗi 2 ngày. Điều này chứng tỏ, cả hai mẫu ni cấy đều có sự tăng lên về lượng tế bào sống hay nói cách khác có sự tăng trưởng và phát triển của tế bào.
70
A B C
Với mẫu tế bào nuôi trên đĩa, tế bào bắt đầu tăng trưởng khá rõ ở ngày thứ 8 và đến ngày thứ 12 cho thấy sự tăng trưởng mạnh. Điều này chứng tỏ hADSC đã phân lập tăng trưởng một cách bình thường.
Với mẫu tế bào nuôi trên khung fibrin, tế bào bắt đầu tăng trưởng rõ rật ở ngày thứ 8 và tiếp tục duy trì sự tăng trưởng mạnh đến ngày thứ 12. Ở ngày thứ 8, mẫu tế bào ni trên khung có sự tăng trưởng vượt trội hơn so với mẫu tế bào nuôi trên đĩa và tế bào tiếp tục duy trì sự tăng trưởng cho đến ngày thứ 12.
Để đánh giá khả năng cố định, bám dính và phát triển của hADSC trong khung fibrin, mẫu tế bào được nuôi trong khung fibrin sẽ được cố định và nhuộm mô học sau 7 ngày ni cấy. Kết quả trình bày trong Hình 3.30.
Hình 3.32. Kết quả ni cấy hADSC trên khung fibrin sau 7 ngày. (A). Mẫu tế bào
phát triển trong khung fibrin in vitro (20X). (B). Mẫu tế bào hADSC phát triển trên khung fibrin được nhuộm H&E tại ngày thứ 7 (4X). (C). Hình ảnh phóng đại trong khung trắng của hình (B) tại vật kính (20X).
Theo kết quả quan sát dưới kính hiển vi đảo ngược (hình 3.32 A), tế bào cho thấy phát triển khá tốt trong khung fibrin, bào tương tế bào phân nhánh và phát triển đều trong khung. Tuy nhiên, hình thái tế bào có sự thay đổi, khơng cịn thấy hình thái thon dài, đặc trưng của hADSC mà tế bào cho thấy có hình đa diện hoặc bầu dục, bào tương phân nhánh nhiều. Điều này có thể giải thích là do q trình phát triển trong mạng lưới của khung fibrin, tế bào khơng cịn giữ hình thái của hADSC nửa mà chịu sự chi phối về mặt động học của khung, do đó, tế bào cần phải phân nhánh nhiều để hấp thu chất dinh dưỡng và chịu sự tác động của hệ thống sợi bên trong khung nên hình thái khơng cịn thon dài.
Kết quả mơ học cho thấy (hình 3.32 B), tế bào phân bố khá đồng đều trong khung fibrin, đây là kết quả trực tiếp từ việc cố định tế bào trên khung, nếu huyền phù tế bào từ hai thành phần fibrinogen và thrombin đều nhau, thì tế bào sẽ phân bố một cách đồng đều và phát triển đều khắp trong khung fibrin sau khi được tạo thành. Khi quan sát ở vật kính lớn hơn (20X) ở hình 3.32 C, kết quả tế bào phát triển trong khung có thể
71
dễ dàng được quan sát, các tế bào có nhân bắt màu tím đậm (mũi tên trong hình 3.32C) cùng một quầng sáng bao quanh khối nhân (đây chính là phần bào tương cịn lại của tế bào sau khi thực hiện nhuộm mô học). Kết quả mô học và quan sát trực tiếp trên in vitro cho thấy kết quả đánh giá này khá tương đồng. Các tế bào có hình thái bầu dục