C, 5% CO2 Vì khung G-A có cấu trúc lỗ xốp nên các tế bào sau khi được chuyển lên khung và nuôi trong mơi trường phù hợp sẽ di cư, bám dính và
Thời gian (giờ) GA73GA82 GA
3.2.2.5. Đánh giá độc tính in vitro của khung fibrin đối với tế bào nuôi cấy
Đánh giá độc tính cấp tính của vật liệu đối với tế bào trong điều kiện in vitro theo tiêu chí ISO 10993-5:2009 (Tests for Cytotoxicity—In Vitro Methods).
Nguyên bào sợi người được sử dụng để đánh giá khả năng gây độc của khung fibrin. Nuôi nguyên bào sợi trong chai nuôi 25 cm2 với môi trường DMEM/F12. Thay môi trường mỗi 3 ngày. Khi quan sát dưới kính hiển vi quang học thấy mật độ tế bào đạt > 80% diện tích bề mặt chai ni, cấy chuyền tế bào. Số tế bào này sau đó sẽ được ni trong khối keo fibrin để đánh giá xem khối keo có ảnh hưởng lên khả năng sống và tăng trưởng của tế bào hay không ?
Tế bào được nuôi trong keo fibrin trên đĩa 6 giếng. Được quan sát bằng kính hiển vi đảo ngược để theo dõi và đánh giá sự bám dính và phát triển của nguyên bào sợi trong khoảng thời gian 48 giờ.
Sau khoảng thời gian theo dõi và đánh giá cho thấy, khung fibrin không gây độc đối với nguyên bào sợi. Kết quả nuôi cho thấy trong 24 giờ đầu, các tế bào có dấu hiệu thích nghi và bắt đầu bám dính trên bề mặt của khung fibrin. Sau khoảng thời gian từ 24-48 giờ, các tế bào bắt đầu bám dính, tăng trưởng và phát triển trên bề mặt khung (hình 3.26). Kết quả này chứng minh rằng, khung fibrin không gây độc đối với tế bào trong đánh giá độc tố in vitro.
60
Hình 3.26. Kết quả đánh giá khả năng gây độc in vitro của khung fibrin đối với
nguyên bào sợi. (A). Khung fibrin chứng, khơng có ni tế bào. (B). Khung fibrin
được sử dụng để nuôi nguyên bào sợi trong khoảng 24 giờ đầu nuôi cấy, các tế bào bắt đầu được cố định và bám dính trên khung, chưa có nhiều tế bào bắt đầu phát triển (chủ yếu là các tế bào tròn, bầu dục) (10X). (C). Sau khoảng thời gian 24-48 giờ nuôi cấy, các tế bào bắt đầu phân chia mạnh, một số tế bào bám dính và phân chia, có hình thái đặc trưng của nguyên bào sợi (10X).
61
3.3. NỘI DUNG 3: