C, 5% CO2 Vì khung G-A có cấu trúc lỗ xốp nên các tế bào sau khi được chuyển lên khung và nuôi trong mơi trường phù hợp sẽ di cư, bám dính và
Thời gian (giờ) GA73GA82 GA
3.2.2.3. Đánh giá cấu trúc của khung fibrin
Khung fibrin sau khi được tạo ra sẽ tiến hành nhuộm H&E theo quy trình như sau:
Bảng 3.8. Quy trình nhuộm mơ học H&E cho mẫu Fibrin.
1 Làm tan parafin trong tủ ấm 560C- 600C
8 Nhúng vào Acid cồn 1% 2 lần 2 Xylen I 5 phút 9 Rửa nước thường 5 phút 3 Xylen II 5 phút 10 Cồn 70 2 phút 4 Cồn 100-90-80 1 phút 11 Eosin 3 phút 5 Rửa nước 2 phút 12 Cồn 90-90-100-100 1 phút 6 Hematoxylin 4 phút 13 Xylen 5 phút 7 Rửa nước thường 1 phút 14 Dán lame
Kết quả được đánh giá trên kính hiển vi quang học và ghi nhận lại bằng hình ảnh (Hình 3.25).
Kết quả tạo khung fibrin cho thấy về mặt vật lý, khung fibrin được tạo ra có màu vàng sáng, mềm dẻo và có độ đàn hồi nhất định. Thể tích của khung có thể được điều chỉnh dễ dàng tùy theo thể tích của hai thành phần tạo thành là fibrinogen và thrombin. Kết quả mô học cho thấy khung tạo ra có cấu trúc xốp, tạo thành các lỗ, các lỗ xốp này liên thơng được với nhau. Bản chất của khung chính là do các sợi protein đan vào nhau mà tạo thành. Kích thước các lỗ to nhỏ không đều nhau. Bề mặt khung tương đối
58
A B
D C C
nhám, có nhiều rãnh, khe thuận lợi cho tế bào bám dính và phát triển (kết quả chụp SEM).
Như vậy, khung fibrin được tạo ra đáp ứng được các tiêu chí cho một giá thể để có thể dùng để ni cấy tế bào là có cấu trúc xốp, các lỗ liên thơng với nhau, điều này giúp cho q trình vận chuyển và trao đổi chất dinh dưỡng của tế bào khi được nuôi trên khung sẽ dễ dàng hơn cũng như việc loại bỏ các chất cặn bả ra khỏi tế bào. Bề mặt tế bào nhám, có nhiều rảnh, nếp gấp thuận lợi cho tế bào bám dính. Với khung được tạo ra như thế này, có thể đảm bảo cho tế bào phát triển được bên trong cũng như trên bề mặt của khung.
Hình 3.25. Kết quả nhuộm HE cho khung fibrin. (A) Kết quả sau khi tạo khung
fibrin được quan sát bằng kính hiển vi đảo ngược (10X). (B). Kết quả nhuộm H&E cho khung fibrin được chụp ở vật kính 10X. (C). Kết quả nhuộm H&E cho khung fibrin được chụp ở vật kính 20X. (D). Kết quả khảo sát bề mặt khung bằng kính hiển vi điện tử truyền suốt (SEM, x400).
Dựa vào kết quả thu được từ nhuộm H&E và SEM trên khung fibrin, có thể đưa ra nhận định chung, khung fibrin có một cấu trúc xốp, cấu tạo từ những sợi protein đan chéo vào nhau. Sợi protein này có đường kính trung bình khoảng 0,5 µm, kích thước
59
các lỗ không đồng nhất trong tồn bộ khung, kích thước này dao động nằm trong khoảng từ 30-60 µm. Kết quả này phù hợp với quá trình tạo khung fibrin trong cơ thể để ngăn quá trình chảy máu bằng cách tạo ra cục máu đơng, có bản chất là khung fibrin.