Nguyên lý hoạt động
Enzyme glucoseoxidase xúc tác quá trình oxy h a β-D-glucose thành - gluconic acid α- -glucose trong máu nhanh ch ng chuyển sang dạng β vì vậy tất cả glucose đều được đo trong cùng một thời điểm ảm biến sinh học enzyme glucose sử dụng một điện cực thay O2 tác động lên lượng glucose khử. Trong phản ứng mở vòng dưới tác dụng của enzyme glucoseoxidase và điện cực trong que thử làm mất các electron cần thiết, nhóm aldehyde ở C1 bị chuyển thành acid acid- - gluconic và hình thành H2O2 òng điện tử được tạo ra tương ứng với nồng độ glucose trong máu.
Phương pháp tiến hành
Máy Truetrack đo lượng đường glucose trong máu toàn phần Máu được thấm vào đầu trên của que thử và tự động hút vào vùng đo nơi phản ứng xảy ra.
- Gắn một que thử để bật máy.
- Tạo vết cắt trên đuôi chuột, bỏ giọt máu đầu, lấy giọt máu thứ 2. Mẫu máu dùng cho việc đo là l phải là một máu tròn đầy. Thấm nhẹ giọt máu vào điểm nhận máu trên đầu que thử. Sau 5 giây kết quả sẽ hiện thị trên màn hình.
2.3.5. Phƣơng pháp xử lý số liệu
Kết quả được thể hiện dưới dạng trung bình SD. Số liệu được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel 0 0 và phân tích phương sai NOV ằng SAS 9.4.
CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Kết quả đánh giá khả năng chống oxy hóa 3.1. Kết quả đánh giá khả năng chống oxy hóa
3.1.1. Mô hình quét gốc tự do DPPH
Phương pháp qu t gốc tự do DPPH là một phương pháp thường được sử dụng cho việc khảo sát khả năng ức chế gốc tự do Phương pháp này được dùng phổ iến vì đơn giản nhanh ch ng và ổn định. DPPH là một gốc tự do c ước sóng cực đại hấp thu tại nm và c màu tím ác chất c khả năng chống oxy hóa sẽ trung hòa gốc DPPH bằng cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thu tại ước sóng cực đại và màu của dung dịch phản ứng sẽ nhạt dần chuyển từ tím sang vàng nhạt
Hiệu quả quét gốc tự do của dịch chiết ethanol của 20 mẫu cây trong thử nghiệm loa i gốc DPPH được trình bày ở Bảng 3.1.
Bảng 3.1. Hoạt tính quét gốc tự do DPPH của 20 mẫu cây STT Mẫu % ức chế DPPH 1 Achyranthes aspera 22,13 1,23 2 Acorus calamus 22,45 1,48 3 Bupleurum chinense 15,07 0,50 4 Carica papaya 19,94 1,23 5 Gardenia jasminoides 35,19 0,95 6 Glycyrrhiza uralensis 67,79 3,07 7 Mangifera indica 83,78 2,88 8 Momordica charantia 42,33 0,62 9 Nephelium lappaceum 94,02 0,56 10 Oroxylum indicum 92,30 2,19 11 Oxalis corniculata 38,87 1,35 12 Pandanus tectorius 25,12 0,91 13 Plantago major 48,73 2,23 14 Perilla frutescens 42,79 2,11 15 Polycarpaea arenaria 50,24 0,96 16 Portulaca oleracea 23,42 0,80 17 Psidium guajava 93,23 0,64 18 Polyscias fruticosa 26,17 0,90 19 Typhonium trilobatum 40,31 0,24 20 Wedelia chinensis 34,68 1,15
Kết quả cho thấy hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của các cao chiết phân bố trong một phạm vi rộng, từ 0 % đến 94,02% tại nồng độ 1mg/ml của các mẫu cao chiết Trong đ c mẫu có hoạt tính ức chế gốc tự do PPH dưới 50% và 6 mẫu có hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH trên 50% là Glycyrrhiza uralensis (cam
thảo bắc), Mangifera indica (xoài), Nephelium lappaceum (chôm chôm), Oroxylum
indicum (núc nác), Polycarpaea arenaria (sài hồ nam), Psidium guajava (ổi).
Kết quả thử nghiệm cho thấy hoạt tính loại gốc tự do ở nồng độ mg ml của mẫu lá Nephelium lappaceum (chôm chôm), Psidium guajava (ổi), Oroxylum indicum núc nác rất mạnh với giá trị % ức chế DPPH lần lượt là 94,02 0,56; 93,23 0,64; 92,30 2,19 gần bằng với giá trị của chất đối chứng ascorbic acid (vitamin C) là 94,40 0,95 và mẫu lá Mangifera indica (xoài) với 83,78 2,88 % ức chế DPPH.
Nghiên cứu trước đây của Nont Thitilertdecha et al. (2010) về khả năng chống oxy hóa của các hợp chất cô lập được từ vỏ quả chôm chôm là ellagic acid (EA), corilagin và geraniin cho thấy rằng so với chất chống oxy hoá tổng hợp (BHT), 3 hợp chất này có khả năng ắt gốc tự do PPH đáng kể Đây là tất cả các hợp chất chống oxy hóa mạnh bởi chúng có một số lượng lớn các nh m hydroxyl và đặc biệt là nhiều nhóm ortho-dihydroxy. Ba hợp chất polyphenol này được xác định là có các đặc tính bắt các ROS mạnh khác nhau cho anion superoxide (O2-), gốc hydroxyl (-OH) và gốc peroxyl (ROO-). Cao chiết ethanol từ lá chôm chôm có hoạt tính chống oxy hóa mạnh cũng c thể cùng lý do trên.
Bốn mẫu cao chiết có hoạt tính quét gốc tự do DPPH tốt tiếp tục được xác định giá trị IC50 với acid ascorbic (vitamin C) là đối chứng. Giá trị IC50 (Inhibitory concentration) là nồng độ chất chống oxy hóa cần để ức chế (trung hòa) 50% gốc tự do DPPH trong khoảng thời gian xác định.
Hình 3.1. Hoạt tính loại gốc tự do DPPH ở nồng độ 1mg/ml của dịch chiết ethanol
từ 4 mẫu CC: chôm chôm, XO: xoài, OI: ổi, NN: núc nác so sánh với AA: ascorbic acid.
Để xác định chỉ số IC50, mỗi cao chiết được pha thành 6 nồng độ 1 mg/ml; 0,5 mg/ml; 0,25 mg/ml; 0,125 mg/ml; 0,0625 mg/ml và 0,03125 mg/ml tương ứng với các nồng độ cuối của mẫu trong hỗn hợp phản ứng là 24,3902 µg/ml; 12,1951 µg/ml; 6,0975 µg/ml; 3,0488 µg/ml; 1,5244 µg/ml và 0,7622 µg/ml. Sau đ hoạt tính ức chế DPPH ở mỗi nồng độ đươ c xác định và c được đường chuẩn tương ứng với mỗi mẫu. Từ đ kết quả xác định IC50 của các dịch chiết so với Vitamin C được trình bày ở hình 3.2, giá trị IC50 càng thấp chứng tỏ khả năng chống oxy hóa càng mạnh. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 CC XO OI NN AA % ức chế PPH Mẫu %
Hình 3.2. Hoạt tính loại gốc tự do thông qua giá trị IC50 của dịch chiết ethanol từ 4 mẫu CC: chôm chôm, XO: xoài, OI: ổi, NN: núc nác so sánh với AA: ascorbic acid.
IC50 của dịch chiết ethanol từ 4 mẫu lá chôm chôm, xoài, ổi, núc nác lần lượt là 6,85 µg/ml, 10,46 µg/ml, 4,14 µg/ml và 4,34 µg/ml có sự khác biệt so với hoạt tính chống oxy h a của vitamin I 50= 2,73µg/ml).
Giá trị IC50 của cao chiết ethanol từ lá xoài trong nghiên cứu này không có sự khác biệt đáng kể so với nghiên cứu trước đây của Mohan et al. (2013). Nghiên cứu trước đây cho thấy hoạt tính bắt gốc tự do DPPH của cao chiết methanol, ethyl acetat và n-butanol từ lá xoài với giá trị IC50 lần lượt là 13,37; 3,55 và 14,19 µg / mL và so sánh với chất đối chứng acid gallic với giá trị IC50 là 1,88 µg / mL.
3.1.2. Mô hình FRAP
Phương pháp này dựa vào sự khử phức Fe(III)–TPTZ thành phức Fe(II)– TPTZ bền hơn ằng một chất khử chất chống oxi hoá) ở pH thấp e II – TPTZ c màu xanh dương đậm Như vậy sau phản ứng nếu Fe2+-TPTZ sinh ra càng nhiều màu của dung dịch càng đậm và ngược lại Từ đ c thể suy ra hoạt lực của chất chống oxy hóa.
Hoạt lực của chất chống oxy hoá được đánh giá thông qua giá trị FRAP xác định từ đường chuẩn. Giá trị FRAP càng lớn chất chống oxi hoá càng mạnh
0 2 4 6 8 10 12 CC XO OI NN AA IC50(µg/ml) Mẫu %