11.1. Nguyên liệu
Bột citroflavonoid là sản phẩm của qui trình chiết xuất qui mô pilot, đạt tiêu chuẩn cơ sở đã xây dựng.
Động vật thí nghiệm
Thỏ chủng Newzeland White, trƣởng thành, khỏe mạnh, cả 2 giống, trọng lƣợng từ 1,8- 2,2 kg, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm.
Các bộ kít định lượng
Các bộ kít định lƣợng AST, ALT, Ure, Creatinin, Protein toàn phần, bilirubin toàn phần. Các bộ kít phân tích số lƣợng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, giá trị hematocrit, nồng độ hemoglobin và % lympho bào.
11.2. Thực nghiệm
Độc tính bán trƣờng diễn của thuốc trên thỏ đƣợc thử theo phƣơng pháp của Viện Dƣợc liệu, đƣợc mô tả cụ thể trong phần Phƣơng pháp.
11.3. Kết quả
11.3.1. Kết quả theo dõi tình trạng chung và cân nặng động vật thí nghiệm
- Tình trạng chung: Ở lô uống thuốc và lô chứng, hoạt động, ăn uống, bài tiết của các thỏ vẫn bình thƣờng, không có sự khác biệt nào.
- Cân nặng động vật thí nghiệm (Bảng 31). Trọng lƣợng thỏ ở cả hai lô đều tăng lên so với ban đầu, sự tăng lên này giữa lô chứng và lô uống thuốc là nhƣ nhau, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê. Điều này cho thấy thuốc không có ảnh hƣởng đến cân nặng của thỏ.
Bảng 31. Trọng lƣợng thỏ thí nghiệm ở các thời điểm theo dõi (kg)
Lô thử Trƣớc khi uống thuốc Sau 15 ngày uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc Sau 15 ngày ngừng uống thuốc Lô 1 1,89 ± 0,09 2,04 ± 0,07 * 2,08 ± 0,10 * 2,20 ± 0,10 * Lô 2 1,85± 0,06 1,91 ± 0,08 2,00 ±0,08 * 2,07 ± 0,07 *
*: Sự tăng trọng lƣợng có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 so với trƣớc khi uống; Trọng lƣợng của lô thuốc so với lô chứng ở cùng thời điểm khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05).
11.3.2. Kết quả theo dõi các chỉ số huyết học
Các chỉ số huyết học đƣợc kiểm tra gồm có số lƣợng bạch cầu, số lƣợng hồng cầu, số lƣợng tiểu cầu, nồng độ hemoglobin, hematocrite và lympho bào của các lô. Kết quả theo dõi các chỉ số huyết học cho thấy sau 15 ngày, 30 ngày uống thuốc và sau ngừng thuốc 15 ngày đƣợc trình bày ở Bảng 32. Kết quả cho thấy tất cả các xét nghiệm đánh giá nhƣ số lƣợng hồng cầu, số lƣợng bạch cầu, số lƣợng tiểu cầu, nồng độ hemoglobin, giá trị hematocrit và % lympho bào ở lô thuốc không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng ở cùng thời điểm cũng nhƣ so sánh với bản thân chúng trƣớc khi dùng thuốc (P > 0,05).
Kết quả theo dõi các chỉ số huyết học cho biết sản phẩm bột citroflavonoid không có ảnh hƣởng đáng kể đến các chỉ số huyết học khi thỏ uống thuốc trong thời gian 30 ngày liền.
Bảng 32. Kết quả theo dõi các chỉ số của máu thỏ ở các lô thí nghiệm
Lô thử Trƣớc khi uống thuốc 15 ngày từ khi uống thuốc 30 ngày từ uống thuốc Sau 15 ngày ngừng uống thuốc Số lượng bạch cầu (103/mm3) Lô 1 9,25 ±0,55 8,28 ± 0,25 8,36 ± 0,55 9,20 ± 0,76 Lô 2 7,75 ± 0,80 8,36 ± 0,71 8,95 ± 0,56 8,10 ± 0,63 Số lượng hồng cầu (106/mm3) Lô 1 5,40 ± 0,30 4,95 ± 0,30 4,53 ± 0,45 4,81 ± 0,42 Lô 2 6,26 ± 0,30 5,76 ± 0,17 5,64 ± 0,27 6,05 ± 0,38
Số lượng tiểu cầu (106/mm3)
Lô 1 429,88 ± 99,23 448,63 ± 63,60 481,13 ± 35,52 333,17 ± 80,17
Lô 2 467,25 ± 79,30 397,25 ± 99,1 480,88 ± 59,60 406,00 ± 35,38
Nồng độ hemoglobin trong máu (g/dl)
Lô 1 9,13 ± 0,40 8,68 ± 0,43 7,95 ± 0,78 8,07 ± 0,40 Lô 2 9,69 ± 0,56 8,69 ± 0,46 8,96 ± 0,23 9,18 ± 0,42 Hematocrite (%) Lô 1 33,04 ± 1,58 32,26 ± 1,54 30,84 ± 2,43 31,82 ± 1,48 Lô 2 36,19 ± 1,94 33,11 ± 1,55 34,63 ± 0,81 35,17 ± 0,76 Lympho bào (%) Lô 1 43,81 ± 4,65 51,69 ± 4,49 55,40 ± 4,97 49,37 ± 3,60 Lô 2 47,30 ± 4,82 45,20 ± 6,12 51,05 ± 3,57 46,08 ± 3,79
11.3.3. Kết quả theo dõi các chỉ số thuộc chức năng gan
Kết quả thu đƣợc trình bày trong các Bảng 33 cho thấy sau 15 ngày, 30 ngày uống thuốc và sau ngừng thuốc 15 ngày, tất cả các xét nghiệm đánh giá chức năng gan: nồng độ bilirubin, nồng độ protein, hoạt độ enzym AST và ALT huyết thanh ở lô thuốc đều không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng ở cùng thời điểm cũng nhƣ so sánh với bản thân chúng
trƣớc khi dùng thuốc (P> 0,05). Có thể kết luận sản phẩm bột citroflavonoid không có ảnh hƣởng đáng kể đến chức năng gan thỏ uống thuốc liên tục trong 30 ngày.
Bảng 33. Kết quả theo dõi các chỉ số thuộc chức năng gan thỏ ở các lô thí nghiệm
Lô thử Trƣớc khi uống thuốc Sau 15 ngày uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc Sau 15 ngày ngừng uống thuốc Nồng độ bilirubin (µmol/l) Lô 1 18,59 ± 2,22 20,75 ± 2,15 19,96 ± 0,92 22,18 ± 2,27 Lô 2 17,61 ± 1,58 20,38 ± 1,27 17,42 ± 0,86 17,22 ± 0,57
Nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh (g/dl)
Lô 1 5,92 ± 0,10 6,04 ± 0,11 6,02 ± 0,26 6,05 ± 0,38 Lô 2 6,03 ± 0,21 6,41 ± 0,14 6,39 ± 0,17 6,20 ± 0,19
Hoạt độ enzyme AST (U/l)
Lô 1 38,15 ± 1,58 38,96 ± 2,52 38,23 ± 3,13 41,43 ± 4,03 Lô 2 41,61 ± 1,91 41,70 ± 2,50 43,34 ± 3,68 40,97 ± 6,11
Hoạt độ enzyme ALT (U/l)
Lô 1 37,36 ± 3,42 35,12 ± 2,81 37,19 ± 2,10 33,70 ± 3,15 Lô 2 40,13 ± 2,66 36,42 ± 2,36 41,30 ± 2,55 42,75 ± 3,39
11.3.4. Kết quả theo dõi các chỉ số thuộc chức năng thận
Các chỉ số theo dõi chức năng thận gồm có nồng độ urê và creatinin huyết thanh (Bảng 34). Các nồng độ này của các lô thỏ tại một thời điểm so với trƣớc thí nghiệm không khác nhau có ý nghĩa thống kê, và lô uống thuốc so với lô chứng tại cùng thời điểm không khác nhau có ý nghĩa thống kê (P > 0,05).
Bảng 34. Kết quả theo dõi các chỉ số thuộc chức năng thận thỏ ở các lô thí nghiệm
Lô thử Trƣớc khi uống thuốc Sau 15 ngày uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc Sau 15 ngày ngừng uống thuốc Nồng độ urê huyết (mg/dl) Lô 1 29,73 ± 1,62 25,11 ± 3,34 26,37 ± 1,86 30,89 ± 6,87 Lô 2 28,59 ± 2,16 28,89 ± 3,71 25,12 ± 4,68 28,50 ± 3,04
Nồng độ creatinin huyết thanh (µmol/l)
Lô 1 111,44 ± 4,69 109,48 ± 3,95 122,30 ± 4,37 112,19 ± 5,44 Lô 2 114,64 ± 4,12 112,35 ± 3,65 124,66 ± 6,66 128,92 ± 8,11
Nhƣ vậy, cho thỏ uống thuốc liên tục trong 15 ngày, 30 ngày và sau ngừng thuốc 15 ngày, kết quả các xét nghiệm đánh giá chức năng thận nhƣ nồng độ ure và nồng độ creatnin huyết thanh ở lô thuốc không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng ở cùng thời điểm cũng nhƣ so sánh với bản thân chúng trƣớc khi dùng thuốc. Điều này có nghĩa là sản phẩm bột citroflavonoid không có ảnh hƣởng đến các chỉ số này.
11.3.5. Kết quả xét nghiệm mô học
a) Thực nghiệm
Sau khi cho thỏ uống thuốc 30 ngày, mỗi lô lấy ngẫu nhiên 2-3 thỏ mổ để quan sát đại thể các cơ quan và kiểm tra cấu trúc vi thể gan và thận. Các thỏ còn lại ngừng uống thuốc và tiếp tục nuôi 15 ngày nữa. Sau 15 ngày ngừng thuốc, tất cả các thỏ đƣợc mổ để quan sát đại thể các cơ quan. Kiểm tra cấu trúc vi thể gan và thận mỗi lô 2-3 con.
b) Kết quả
Đại thể các cơ quan
Tất cả các thỏ ở cả 2 lô đƣợc mổ để quan sát không thấy có thay đổi bệnh lý nào về mặt đại thể của các cơ quan tim, phổi, gan lách, tụy, thận và hệ thống tiêu hóa.
Hình thái vi thể gan và thận thỏ Hình thái vi thể của gan:
- Lô 2 (Lô chứng): Cấu trúc các tiểu thùy nguyên vẹn, các bè gan không thay đổi. Tế bào gan hình thái rõ, có kích thƣớc đều, màng tế bào nguyên vẹn, nhân tòn đều, bào tƣơng sáng, không có thoái hóa hoặc các ổ hoại tử, khoảng cửa không viêm, tĩnh mạch trung tâm và xoang mạch không xung huyết.