4. PHÂN LẬP CÁC CITROFLAVONOID CHÍNH LÀM CHẤT ĐỐI CHIẾU
4.2.3.Điều chế Naringenin (CF-3)
a) Nguyên liệu
Nguyên liệu để điều chế naringenin là naringin đƣợc phân lập từ vỏ quả bƣởi (Citrus
grandis (L.) Osbeck). Naringin dùng cho thí nghiệm này có độ tinh khiết > 90%. b) Nguyên tắc điều chế naringenin
Nguyên tắc của phƣơng pháp điều chế là thủy phân liên kết glycosid bằng acid HCl/MeOH (tỉ lệ 1:9) ở nhiệt độ sôi của dung môi (Hình 17).
O O OH O OH O O OH HO HO O OH HO H3C OH Naringin O O OH HO OH Naringenin HCl/MeOH (1:9) to
Hình 17. Nguyên tắc điều chế naringenin
c) Thủy phân naringin
Hòa tan 1 g naringin trong 70 ml hỗn hợp dung môi MeOH–HCl đặc (9:1, tt/tt) trong 1 bình cầu 1 lít và đun hồi lƣu cách thủy sôi trong suốt 12 giờ. Thu hồi MeOH bằng cô giảm áp đến khi còn khoảng 30 ml. Để nguội cho kết tinh, lọc, rửa tủa bằng nƣớc lạnh cho đến khi nƣớc rửa có pH trung tính. Sấy khô ở 70oC thu đƣợc 230 mg. Hiệu suất thủy phân đạt đƣợc là 46%.
d) Tinh chế CF-3
Hòa tan sản phẩm thu đƣợc sau thủy phân trong 25 ml cồn 96%, để lạnh ở 4-5oC trong 48h. Lọc, rửa các tinh thể bằng MeOH lạnh. Chất thu đƣợc cho chạy qua cột sắc ký silica gel pha thƣờng, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan–EtOAc–MeOH (10:10:1). Kiểm tra các phân đoạn bằng SKLM để thu lấy phân đoạn có đơn chất. Cất thu hồi dung môi, để cho kết tinh lại
thu đƣợc sản phẩm thủy phân đƣợc kí hiệu là CF-3. Kiểm tra độ tinh khiết bằng HPLC cho thấy chất phân lập đƣợc có độ tinh khiết là 97,0% (>95%).
e) Nhận dạng chất CF-3
Chất CF-3: bột màu trắng; nhiệt độ nóng chảy 247-250 oC; Phổ UV (trong MeOH) λmax 288 nm; Phổ IR (viên nén KBr): νmax cm-1: 3298 (OH), 1640 (C=O), 1597, 1511 (C=C), 1065 (C−O). Phổ 1
H và 13C NMR (trong DMSO): xem Bảng 9; Phổ ESIMS: m/z 271 [M + H]+. Chất CF-3 có các phổ UV, IR, 1H và 13C NMR tƣơng tự các phổ của chất CF-1. Khi so sánh số liệu của các phổ này với naringin chuẩnkhông thấy có tín hiệu của phần đƣờng, mà chỉ thấy các tín hiệu của phần aglycon. Nhƣ vậy, CF-3 là aglycon của CF-1, do đó chúng tôi đi đến kết luận chất CF-3 là naringenin (Hình 17).
f) Kết luận
Nhóm nghiên cứu đã xây dựng đƣợc qui trình điều chế và tinh chế naringenin từ naringin phân lập đƣợc từ vỏ bƣởi. Chất thu đƣợc có số lƣợng là 1000 mg, độ tinh khiết của naringenin đạt 97,0%, đạt so với yêu cầu của đề tài là 500 mg và ≥ 95%.