4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
4.7.4.Đánh giá tác dụng phòng chống vữa xơ động mạch
Tác dụng chống vữa xơ động mạch của sản phẩm bột citroflavonoid đƣợc thử trên thỏ. Nguyên tắc là cho thỏ uống cholesterol để làm tăng mỡ máu của thỏ, do đó có thể gây ra sự thay đổi chức năng gan, làm thay đổi quá trình chuyển hóa lipid và dẫn đến bệnh vữa xơ động mạch.
Chuẩn bị hỗn hợp dầu cholesterol
Đun nóng cách thuỷ dầu thực vật, cho cholesterol vào, khuấy đều cho tan hết đạt nồng độ 20% dùng trong nghiên cứu [56].
Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu và chống vữa xơ động mạch
Mô hình gây tăng cholesterol máu ngoại sinh và gây xơ vữa mạch máu [56-58]. Thỏ đƣợc chia thành 5 lô, mỗi lô 10 con với tỉ lệ đực/cái nhƣ nhau ở mỗi lô, các lô đƣợc uống thuốc trong 10 tuần nhƣ sau:
● Lô 1 (lô chứng sinh học, n = 10): hàng ngày thỏ chỉ uống nƣớc cất với cùng thể tích nhóm uống thuốc.
● Lô 2 (lô mô hình, n = 10): hàng ngày thỏ đƣợc uống hỗn hợp dầu cholesterol 1mL/kg thỏ, sau đó 2 giờ cho uống nƣớc cất.
● Lô 3 (lô uống atorvastatin, n = 10): hàng ngày thỏ đƣợc uống hỗn hợp dầu cholesterol liều 500 mg/kg, sau đó 2 giờ cho uống atorvastatin 5 mg/kg.
● Lô 4 (lô uống citroflavonoid thấp, n = 10): hàng ngày thỏ đƣợc uống hỗn hợp dầu cholesterol, sau đó 2 giờ cho uống thuốc thử liều 200mg/kg.
● Lô 5 (lô uống citroflavonoid cao, n = 10): hàng ngày thỏ đƣợc uống hỗn hợp dầu cholesterol liều 500 mg/kg, sau đó 2 giờ cho uống thuốc thử liều 500 mg/kg.
Tiến hành cân kiểm tra trọng lƣợng thỏ ở tất cả các lô tại thời điểm trƣớc, sau thí nghiệm hàng tuần. Vào ngày đầu tiên sau 4 tuần, 8 tuần, và 10 tuần của thí nghiệm, thỏ trong các lô cho nhịn ăn qua đêm. Lấy máu ngoại vi và tiến hành định lƣợng cholesterol toàn phần (TC), triglycerid (TG), high density lipoprotein–cholesterol (HDL-C), và low density lipoprotein–cholesterol (LDL-C). Tại thời điểm sau 8 tuần và 10 tuần uống thuốc, giết ngẫu nhiên 30% số động vật ở tất cả các lô để xét nghiệm đại thể, vi thể của động mạch chủ đoạn ngay trƣớc khi đổ vào động mạch vành và tình trạng nhiễm mỡ của gan thỏ.