7. XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÂN LẬP CITROFLAVONOID TỪ VỎ QUẢ CÁC LOÀ
7.1.1. Nguyên vật liệu
Dƣợc liệu dùng cho nghiên cứu chiết xuất citroflavonoid là vỏ quả quýt (Citrus
reticulata Blanco). Dƣợc liệu thu thập về đƣợc xử lý dƣợc liệu bằng cách sấy khô ở 60oC cho đến độ ẩm < 13%. Bảo quản nguyên liệu trong túi polymer, để nơi khô thoáng, tránh ẩm, mốc.
Chất chuẩn naringin, hesperidin đạt tiêu chuẩn phân tích đƣợc Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ƣơng cung cấp.
Methanol, ethanol dùng cho định lƣợng đạt tiêu chuẩn phân tích (PA). Methanol, ethanol dùng cho chiết xuất là dung môi công nghiệp đƣợc cất lại trƣớc khi dùng.
7.1.2. Thực nghiệm
- Khảo sát các điều kiện chiết xuất bao gồm: chọn dung môi, tỷ lệ dung môi/ dƣợc liệu, nhiệt độ chiết, thời gian chiết, phƣơng pháp loại tạp... Quy mô thí nghiệm: mẻ thăm dò là 10 g dƣợc liệu/mẻ, mẻ xác định độ ổn định là 1000 g dƣợc liệu/mẻ.
- Định tính citroflavonoid trong dƣợc liệu và trong sản phẩm chiết xuất bằng phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng.
- Định lƣợng hàm lƣợng citroflavonoid toàn phần trong dƣợc liệu và sản phẩm bằng phƣơng pháp đo quang (UV-VIS).
- Xác định độ ẩm của mẫu thử: theo DĐVN IV, Phụ lục 12.13: “Xác định hàm lƣợng nƣớc bằng phƣơng pháp cất với dung môi”.
- Tiêu chí đánh giá quy trình : hiệu suất chiết xuất, hàm lƣợng citroflavonoid trong sản phẩm.
Dƣợc liệu dùng để khảo sát có độ ẩm là 8,37% và hàm lƣợng citroflavonoid toàn phần so với khối lƣợng khô tuyệt đối là 9,15%.
Tiến hành thí nghiệm chiết xuất citroflavonoid bằng dung môi nhƣ sau: vỏ quýt (50g) cho vào bình cầu dung tích 1000ml, thêm 250ml dung môi ngâm trong 2 giờ, bổ sung dung môi ngập dƣợc liệu 3 cm (hoặc theo tỷ lệ dung môi/dƣợc liệu khảo sát). Tiến hành chiết bằng đun hồi lƣu cách thủy ở nhiệt độ sôi của dung môi (hoặc nhiệt độ khảo sát) trong 3 giờ (hoặc thời gian khảo sát). Gạn rồi lọc lấy dịch chiết trong, bã dƣợc liệu đƣợc thêm dung môi ngập cách 3cm và chiết tiếp 2 lần. Gộp các dịch chiết và thu hồi dung môi dƣới áp suất giảm đến cao đặc. Hòa tan nóng cao bằng 100ml nƣớc để 24 giờ ở nhiệt độ phòng thấy xuất hiện tủa, lọc thu lấy tủa và sấy ở 600C đến khô, thu đƣợc sản phẩm citroflavonoid thô.
Cân khối lƣợng sản phẩm thô và xác định hàm lƣợng citroflavonoid toàn phần trong sản phẩm thô.