4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
4.7.3.Thử độc tính bán trường diễn
Độc tính bán trƣờng diễn của bột citroflavonoid đƣợc thử trên thỏ theo phƣơng pháp đã mô tả trong tài liệu [54], [55]. Thỏ đƣợc chia ngẫu nhiên làm 2 lô, mỗi lô 10 con, bố trí thí nghiệm các lô thỏ nhƣ sau:
- Lô thử thuốc (Lô 1): uống bột citroflavonoid với liều 600 mg/kg thể trọng thỏ/ ngày.
- Lô đối chứng sinh lý (Lô 2): dùng để tham chiếu, nhằm xác định điều kiện môi trƣờng và các điều kiện ngoại cảnh có thể gây ảnh hƣởng đến tình trạng sức khoẻ của thỏ trong quá trình thí nghiệm.
Mỗi ngày cho thỏ lô thử thuốc uống thuốc và lô thỏ chứng uống nƣớc đun sôi để nguội 1 lần trong ngày, vào buổi sang với thể tích 4ml/kg thể trọng. Thời gian uống thuốc liên tục trong 30 ngày, sau đó dừng uống thuốc và nuôi thỏ thêm 15 ngày nữa. Lấy máu thỏ theo dõi đƣờng tĩnh mạch tai , 4 lần để theo định lƣợng các chỉ số cần theo dõi.
Các chỉ số theo dõi:
- Theo dõi chức năng gan:
Định lƣợng AST, ALT theo phƣơng pháp Reitman-Franker dùng cơ chất L-Aspartat và L-Alanin.
Định lƣợng Protein toàn phần bằng phƣơng pháp Biuret. Định lƣợng Bilirubin bằng phƣơng pháp lên màu. - Theo dõi chức năng thận:
Định lƣợng Creatinin bằng phƣơng pháp Jaffe.
Định lƣợng Ure bằng phƣơng pháp Rappoport dùng men Urease. - Theo dõi chức năng tạo máu:
- Phân tích số lƣợng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, giá trị hematocrit, nồng độ hemoglobin và % lympho bào trên máy phân tích máu tự động.
- Xét nghiệm mô bệnh học:
Cắt và đọc tiêu bản gan, thận sau 30 ngày dùng thuốc và sau 15 ngày ngừng thuốc. Đơn vị thực hiện: Bộ môn giải phẫu bệnh - Trƣờng Đại học Y Hà Nội.
- Đánh giá kết quả thí nghiệm:
So sánh sự thay đổi của các chỉ số sinh hoá, huyết học cũng nhƣ mô bệnh học của thỏ trƣớc khi dùng thuốc và sau khi dùng thuốc của lô thỏ uống thuốc và lô thỏ chứng sau khi uống thuốc 15 ngày, 30 ngày và sau khi ngừng thuốc 15 ngày.