4.1. TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC THÔNG MẠCH SƠ LẠC HOÀN
4.1.1. Tính an toàn của thuốc TMSLH trên thực nghiệm
Dạng thuốc nghiên cứu trên thực nghiệm được chế từ viên hoàn TMSLH thành cao lỏng có tỷ lệ 5,67g dược liệu/1ml cao do Khoa YHCT Bệnh viện Đa khoa Xanh - Pôn bào chế và được thử độc tính cấp LD50 và độc tính bán trường diễntại Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y khoa Hà Nội.
Kết quả thử độc tính cấp LD50 trên chuột nhắt trắng với liều tăng dần từ 76g dược liệu/1kg trọng lượng đến 229g dược liệu/1kg trọng lượng (liều tối đa cú thể uống được). Theo dừi sau 72 giờ và sau bảy ngày uống thuốc khụng thấy dấu hiệu ngộ độc nào ở chuột. Do vậy, không xác định được liều chết LD50 của thuốc.
Trong thực tế lâm sàng việc điều trị NMN sau giai đoạn cấp thường kéo dài. Vì vậy để đánh giá tính an toàn của bài thuốc, tôi tiếp tục nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên thỏ thực nghiệm. Nghiên cứu tiến hành trên hai lô:
Lô trị 1 cho thỏ uống liều 13,61g/kg/ngày (tương đương với liều dùng cho người), lô trị 2 cho thỏ uống liều cao gấp ba lần (40,82g/kg/ngày) liên tục trong bốn tuần và tiếp tục theo dừi sau ngừng thuốc hai tuần. Kết quả nghiờn
cứu cho thấy, tình trạng chung trong suốt thời gian uống thuốc tất cả các lô thỏ vẫn ăn uống bình thường. Cân nặng của tất cả các thỏ đều tăng so với trước khi nghiên cứu. Mức độ gia tăng trọng lượng của thỏ ở cả hai lô trị trong bốn tuần và theo dừi hai tuần sau khi ngừng thuốc khụng cú sự khỏc biệt so với lô chứng (p > 0,05). Như vậy, có thể kết luận rằng TMSLH không làm ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung và mức độ tăng trưởng của thỏ khi uống thuốc liên tục trong bốn tuần, kể cả ở lô thỏ uống liều cao gấp ba lần liều có tác dụng tương đương trên người.
4.1.1.1. Ảnh hưởng của TMSLH đến chức năng tạo máu
Máu là một tổ chức quan trọng vì máu có mối liên quan mật thiết với mọi chức năng, cơ quan trong cơ thể [17]. Về mặt sinh lý, máu chịu ảnh hưởng của tất cả các tổ chức đó nhưng đồng thời cũng bị ảnh hưởng và phản ánh tình trạng của cơ quan tạo máu [31]. Nếu thuốc sử dụng có ảnh hưởng đến cơ quan tạo máu, thành phần của máu sẽ bị thay đổi [71]. Vì vậy có thể nhận định qua các xét nghiệm về số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu của động vật thí nghiệm. Trong nghiên cứu này các chỉ số trên của thỏ ở cả hai lô trị 1 và lô trị 2, sau hai tuần và bốn tuần uống TMSLH và lô chứng, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05).
Huyết sắc tố trong hồng cầu có nhiệm vụ tiếp nhận oxy đi qua phổi và nhường lại oxy đó cho các tế bào khi qua mao mạch [17]. Định lượng huyết sắc tố cho biết chức năng của hồng cầu. Hematocrit là tỷ lệ phần trăm giữa khối hồng cầu và máu toàn phần. Nếu thuốc làm thay đổi số lượng hồng cầu hoặc làm mất nước hay ứ nước trong tế bào máu thì chỉ số này sẽ thay đổi [31]. Trong nghiên cứu này, số lượng huyết sắc tố và hematocrit trên thỏ thí nghiệm ở hai lô trị 1 và lô trị 2 dùng TMSLH và lô chứng đều trong giới hạn bình thường, thay đổi không có ý nghĩa thống kê so với trước khi dùng thuốc và lô chứng ở tất cả các thời điểm hai tuần, bốn tuần uống thuốc và hai tuần ngừng thuốc.
Các kết quả của hệ thống tạo máu trên động vật thực nghiệm khi dùng TMSLH với liều 13,61g/kg/ngày và 40,82g/kg/ngày liên tục từ hai tuần đến
bốn tuần và hai tuần ngừng thuốc cho thấy TMSLH không làm ảnh hưởng đến: số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu, huyết sắc tố và hematocrit so với trước uống thuốc và so với lô chứng (p > 0,05).
4.1.1.2. Ảnh hưởng của TMSLH đến chức năng gan
Trong cơ thể, gan là cơ quan đảm nhiệm nhiều chức năng quan trọng, đặc biệt là chức năng thải độc. Thuốc vào cơ thể có thể gây độc với gan, làm ảnh hưởng đến chức năng gan, tùy lượng thuốc ít hay nhiều mà gan phải có nhiệm vụ chuyển hóa đồng thời khử độc. Nghiên cứu ảnh hưởng của thuốc đối với chức năng gan là rất cần thiết khi nghiên cứu độ an toàn của một thuốc [31]. Vì vậy, khi nghiên cứu đưa vào cơ thể một lượng thuốc và kéo dài sẽ ảnh hưởng đến tế bào gan, biểu hiện bằng sự suy giảm chức năng gan, tế bào gan bị hủy hoại. Tác dụng hủy hoại tế bào gan của thuốc thường được đánh giá bằng việc đo hoạt độ các enzym nguồn gốc gan trong huyết thanh.
Sự tăng hoạt độ các enzym tế bào gan AST, ALT trong huyết thanh động vật thực nghiệm thường gắn liền với độc tính của thuốc do hoại tử tế bào gan và một số tế bào khác trong cơ thể. ALT là enzym có nhiều nhất ở gan, cư trú trong bào tương của tế bào nhu mô gan; khi tổn thương hủy hoại tế bào gan, chỉ cần thay đổi tính thẩm thấu của màng tế bào gan, nồng độ ALT đã tăng cao. AST cư trú trong ty thể, chỉ một phần ba AST cư trú trong bào tương của tế bào gan, khi tổn thương tế bào gan ở mức độ dưới tế bào, AST trong ty thể được giải phóng ra máu ngoại vi [71]. Do vậy, trong tổn thương tế bào gan nói chung nồng độ ALT luôn tăng cao hơn AST. Trong nghiên cứu này, nồng độ enzym ALT và AST không tăng trong huyết thanh ở cả ba thời điểm hai tuần, bốn tuần uống thuốc liên tục và hai tuần ngừng thuốc với liều 13,61g/kg/ngày và 40,82g/kg/ngày, so với trước uống thuốc và so với lô chứng (p > 0,05), chứng tỏ thuốc TMSLH không gây tổn thương tế bào gan thỏ thực nghiệm.
Gan tham gia các quá trình thoái hoá hemoglobin thành bilirubin và đào thải bilirubin theo mật. Xét nghiệm định lượng nồng độ bilirubin trong huyết
thanh để thăm dò chức năng bài tiết và chuyển hoá mật của gan [17]. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy nồng độ bilirubin toàn phần trong máu thỏ ở hai lô trị không thay đổi sau hai tuần, bốn tuần uống thuốc thử và sau khi ngừng thuốc hai tuần so với trước khi uống thuốc và so với lô chứng. Điều này cho thấy thỏ uống thuốc thử TMSLH liều 13,61g/kg/ngày và 40,82g/kg/ngày liên tục trong bốn tuần không ảnh hưởng đến chức năng bài tiết và chuyển hoá mật của gan.
Ngoài ra, gan còn có chức năng chuyển hóa các chất nội sinh, ngoại sinh và quá trình chuyển hoá các chất, trong đó có chuyển hoá protid, lipid, porphyrin... [17], [31].
Protein được tổng hợp ở gan từ các acid amin; để đánh giá một phần chức năng chuyển hoá protid của gan tiến hành định lượng nồng độ protein trong huyết thanh. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy, ở hai lô uống thuốc thử TMSLH nồng độ protein trong huyết thanh thỏ thực nghiệm không thay đổi tại các thời điểm sau hai tuần, sau bốn tuần uống thuốc liên tục và sau khi ngừng thuốc hai tuần so với trước khi uống thuốc và so với lô chứng. Từ đó cho thấy TMSLH liều 13,61g/kg/ngày và 40,82g/kg/ngày, uống liên tục trong bốn tuần trên thỏ không làm ảnh hưởng đến chức năng chuyển hoá protid của gan.
4.1.1.3. Ảnh hưởng của TMSLH đến chức năng thận
Để đảm bảo sự hằng định nội môi, thận là cơ quan có vai trò quan trọng nhất. Khi đưa thuốc vào cơ thể có thể gây tổn thương thận, ảnh hưởng đến chức năng thận. Định lượng nồng độ creatinin trong huyết thanh giúp đánh giá ảnh hưởng của thuốc đến chức năng thận [71]. Creatinin là chất chuyển hoá cuối cùng, sản phẩm phân huỷ của creatin phosphat, nồng độ creatinin không phụ thuộc vào chế độ ăn. Hiện nay đây là một chỉ số thường dùng để đỏnh giỏ và theo dừi chức năng thận vỡ khi cú tổn thương thận, creatinin tăng sớm hơn và tin cậy hơn ure, nồng độ creatinin trong máu càng cao biểu hiện suy chức năng thận càng nặng [31]. Kết quả nghiên cứu cho thấy sau hai tuần, bốn tuần uống thuốc thử liên tục và sau ngừng thuốc hai tuần, nồng độ creatinin trong huyết thanh thỏ ở hai lô trị không thay đổi so với trước khi
uống thuốc và so với lô chứng. Như vậy chứng tỏ TMSLH uống liên tục trong bốn tuần không ảnh hưởng đến chức năng thận.
4.1.1.4. Ảnh hưởng của TMSLH trên mô bệnh học đại thể và vi thể của gan và thận thỏ thực nghiệm
*Đại thể: sau bốn tuần dùng thuốc và hai tuần ngừng thuốc, quan sát đại thể không thấy có các tổn thương tại các cơ quan của thỏ (tim, phổi, gan, lách, tuỵ, thận và hệ thống tiêu hoá).
*Vi thể (xin tham khảo một số ảnh minh họa ở phụ lục 6)
- Hình thái vi thể ở gan: cấu trúc vi thể gan của thỏ lô trị 1 và lô trị 2 (sau khi uống thuốc bốn tuần và sau hai tuần ngừng thuốc) đa số các tế bào gan bình thường, không thoái hoá, không hoại tử. Khoảng cửa không viêm, các tĩnh mạch trung tâm và các xoang mạch không sung huyết. Một số bệnh phẩm, các tế bào gan có bào tương sang, có thoái hóa hạt.
- Hình thái vi thể ở thận: hầu hết cấu trúc vi thể thận ở lô trị 1 sau khi uống thuốc bốn tuần đều có cầu thận kích thước bình thường, khoảng Bowman không hẹp không sung huyết, ống thận không có tổn thương; sau hai tuần ngừng thuốc tất cả các thỏ đều có cầu thận sung huyết nhẹ, ống thận không có tổn thương. Lô trị 2 hầu hết cầu thận bình thường, ở thời điểm sau hai tuần ngừng thuốc đa số bệnh phẩm các cầu thận sung huyết, tất cả các bệnh phẩm ống thận không có tổn thương, không thoái hóa long tế bào.
Những tổn thương này không đặc hiệu và cũng thường gặp ở lô chứng.
Tuy có một vài những tổn thương ở cấu trúc vi thể của gan, thận thỏ ở cả hai lô thuốc thử nhưng các xét nghiệm đánh giá chức năng gan thận không có sự biến đổi theo hướng bất lợi. Như vậy, TMSLH khụng gõy tổn thương rừ rệt cấu trúc vi thể gan, thận của thỏ thực nghiệm.