D. Hàm lượng nước liên kết trong cây
3.2.1.Kết quả tách chiết ADN tổng số
P. Hàm lượng axit amin prolin ðK thường P1 Hàm l ượ ng axit amin prolin sau 1 ngày gây h ạ n
3.2.1.Kết quả tách chiết ADN tổng số
Việc tách chiết axit nucleic thực vật ñể sử dụng trong phân tích sinh học phân tử là một trong những bước quan trọng, bởi ñộ tinh sạch và hàm lượng của ADN thu ñược sẽ ảnh hưởng trực tiếp tới sự thành công của các bước tiếp theọ ðể hạn chế tổng hợp polysaccarit và các hợp chất khác trong lá, 20 giống vừng ñược gieo trong nhà kính, ADN tổng sốñược tách từ lá non khi cây ñược 4 lá thật.
ADN của 20 giống vừng ñược tách chiết và tinh sạch theo phương pháp của Doyle (1987) có cải tiến [87].
Dịch chiết ADN từ thực vật có chứa ARN, protein, polysaccarit, tannin và các sắc tố. Các tạp chất này có thể sẽảnh hưởng ñến phản ứng.
Hầu hết protein sẽ ñược loại khỏi dịch chiết bằng cách biến tính và gây kết tủa bằng chloroform hoặc phenol.
ARN có thể bị loại bỏ khi ủ dịch chiết với RNase ở 370C.
Polysaccarit và các hợp chất khác như polyphenol là những thành phần khó loại bỏ khỏi dịch chiết, gây ức chế hoạt ñộ enzym (Tag-polymerase) và
ảnh hưởng ñến việc xác ñịnh hàm lượng axit nucleic bằng máy quang phổ. Polyphenol (ở dạng oxy hóa) có khả năng liên kết với ADN bằng liên kết
ñồng hóa trị cũng gây ảnh hưởng ñến quá trình nhân bản [168], [234]. NaCl ở
nồng ñộ khoảng 0,5M cùng với CTAB có thể loại bỏ ñược các loại polysaccarit [206].
Sau khi tách ADN tổng số, cần kiểm tra ñộ tinh sạch và hàm lượng ADN của dịch chiết thu ñược trên máy quang phổ và tiến hành ñiện di trên gel agarose 0,8%.
Kết quả kiểm tra trên gel agarose và ñọc nồng ñộ bằng máy quang phổ
nanodrop cho thấy các mẫu ADN tinh sạch, không bị ñứt gãy, nồng ñộ ñạt
ñược từ 100- 600ng/µl.
Hình 3.6. ðiện di ñồ ADN tổng số của 20 mẫu vừng nghiên cứu trên gel agarose 0,8%