2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Phương pháp bố trí thí nghiệm
2.2.4. Phương phỏp nghiờn cứu cỏc chỉ tiờu liờn quan ủến năng suất và phẩm chất hạt vừng
2.2.4.1. Năng suất vừng
Xỏc ủịnh cỏc yếu tố cấu thành năng suất: Số quả/cõy, số hạt chắc/quả, khối lượng 1000 hạt của mỗi giống ủược xỏc ủịnh ở 30 cõy ngẫu nhiờn (theo
nguyờn tắc ủường chộo). Năng suất thực thu (tạ/ha) ủược tớnh từ năng suất thực thu trờn cỏc ụ thớ nghiệm, sau qui ủổi ra tạ/ha.
2.2.4.2. Hàm lượng lipit tổng số
Hàm lượng lipit ủược xỏc ủịnh theo phương phỏp trực tiếp trờn hệ thống bỏn tự ủộng Soxhlet của hóng Gerhardt [4], [30].
Nguyên tắc: Dựa vào khả năng hòa tan của dung môi hữu cơ (petroleum ether) ủể chiết rỳt lipit ra khỏi nguyờn liệu.
Hàm lượng lipit ủược tớnh theo cụng thức:
%
ì100
= −
G Gc X Gm
Trong ủú:
X: Hàm lượng lipit có trong nguyên liệu ở ủộ khụ tuyệt ủối (%)
Gm: Khối lượng gúi mẫu ở ủộ khụ tuyệt ủối (g)
Gc: Khối lượng gúi mẫu ủó chiết rỳt mỡ ở ủộ khụ tuyệt ủối (g)
G: Khối lượng mẫu ủem phõn tớch (g)
2.2.4.3. Các chỉ số của lipit
Chỉ số iot, chỉ số axit, chỉ số xà phũng ủược xỏc ủinh theo cỏc phương pháp hóa sinh thông thường [4], [30].
2.2.4.4. Thành phần và hàm lượng axit amin [6]
Phân tích thành phần và hàm lượng axit amin trên máy phân tích amin tự ủộng HP – Aminoquant series II.
Mẫu ủược thủy phõn bằng HCl 6 N cú chứa 0,5% phenol ở ủiều kiện 1100 trong 24 giờ. Sau khi thủy phân xong, làm sạch dung dịch bằng cách ly tõm hoặc lọc bỏ tủa. Một lượng dung dịch mẫu sẽ ủược ủem cụ ủặc bằng mỏy Speed vac cho ủến khụ. Cặn khụ ủược hũa tan bằng HCl 0,1 N ủể chuẩn bị cho lờn cột sắc ký. Sử dụng mỏy phõn tớch axit amin tự ủộng HP – Aminoquant series II (Do hãng Hewlett Packard (ðức) cung cấp, bao gồm:
RP-1090 WIN HPLC với Diode-Array Detector với 2 hệ bước sóng: 338 nm
cho các axit amin bậc 1 và 262 nm cho các axit amin bậc 2. Phần mềm HP- Chemstation ủiều khiển và phõn tớch số liệu.
2.2.4.5. Hàm lượng một số nguyên tố khoáng [47]
Hàm lượng cỏc nguyờn tố khoỏng N, P, K, Fe, Ca, Mg, S ủược phõn tích tại phòng Hóa phân tích, Viện Hóa học thuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam
• Lưu huỳnh (S) ủược phõn tớch theo phương phỏp khối lượng: Cho dịch chiết tỏc dụng với BaCl2 ủể tạo kết tủa BaSO4. Nung kết tủa cho ủến khối lượng khụng ủổi, dựa vào khối lượng BaSO4 ủể xỏc ủịnh hàm lượng lưu huỳnh.
• Kali (K) ủược phõn tớch theo phương phỏp ủo hấp thụ nguyờn tử trờn máy AAS – 3300 (Perkin Elmer).
• Canxi, Magie (Ca, Mg) ủược xỏc ủịnh bằng phương phỏp chuẩn ủộ EDTA: Mẫu ủược cụng phỏ với hỗn hợp axit HNO3 và HClO4. Chuyển toàn bộ các nguyên tố dinh dưỡng từ dạng hữu cơ sang dạng vô cơ. Xác ủịnh hàm lượng Ca, Mg bằng chuẩn ủộ EDTA.
• Sắt (Fe) ủược xỏc ủịnh theo phương phỏp ủo hấp thụ nguyờn tử trờn máy AAS – 3300 (Perkin Elmer).
• Phospho (P) ủược xỏc ủinh bằng phương phỏp so màu với thuốc thử molipdatamon với sự có mặt của axit ascorbic tạo phức màu xanh. So màu phức chất ở bước sóng 885 nm trên máy UV-Visible Spectro- photometer Cintra 40.
• Nitơ (N) ủược xỏc ủịnh theo phương phỏp Microkjeldahl 2.2.4.6. Hàm lượng các axit béo không no [124]
Chiết axit béo: Cân chính xác khoảng 3gam mẫu vào ống Falcon 50ml.
Thêm 20 ml hỗn hợp CHCl3:MeOH (2:1). Siêu âm lạnh 15 phút, ly tâm 3000 vòng/phút trong 10 phút. Hút lấy dung dịch dưới vào bình gạn 500ml có sẵn
10ml NaCl 10%. Tiếp tục chiết lại lớp trên bằng 20 ml hỗn hợp CHCl3:MeOH (2:1). Gộp dịch ly tõm thu ủược vào bỡnh gạn. Lọc qua Na2SO4 khan vào bỡnh cụ quay. Tiến hành cụ quay ủến khụ ở 400C
Giai ủoạn dẫn xuất (methyl húa thành axit bộo): Cõn chớnh xỏc 20mg chất bộo. Hũa tan trong 1ml C6H6. Thờm tiếp 3 ml natrimetylat 5%. Lắc, ủể yờn 10 phỳt ở nhiệt ủộ phũng. Trung hũa bằng CH3COOH 0,5N. Thờm 10ml n-hexan, lắc, ly tâm, lấy lớp trên cho vào máy sắc ký khí.
Kết quả: Hàm lượng từng axit béo theo phần trăm tính theo công thức :
m S
f 100 S
x (g/100g) C
béo Axit
c m c
ì
ì
= ì
Trong ủú : Cc: Nồng ủộ của axit bộo (ppm)
Sm,Sc: Diện tích (hoặc chiều cao) của mẫu m: Khối lượng của mẫu thử (g)
f: ðộ pha loãng 2.2.5. Phương pháp xử lí số liệu:
Cỏc kết quả nghiờn cứu ủược xử lớ và ủỏnh giỏ theo phương phỏp toỏn thống kê sinh học [26], [27], [29] thông qua các thông số: trung bình mẫu (X), phương sai (S2), sai số trung bỡnh số học (m), tiờu chuẩn ủộ tin của hiệu (t), so sỏnh hai trung bỡnh mẫu. Tiờu chuẩn ủộ tin của hiệu (t) ủược so với bảng phõn phối Student với số bậc tự do: (n1 + n2 – 2), mức ý nghĩa α = 0,05.
Cỏc thụng số ủược tớnh toỏn bằng phần mềm Ecxel-WindowsXP.
Lưu ý: Dấu * trong mỗi hàng và các chữ cái khác nhau trong mỗi cột thể hiện sự sai khỏc cú ý nghĩa thống kờ với ủộ tin cậy α = 0,05, cũn cỏc chữ cái giống nhau hoặc không có * thể hiện sự sai khác không có ý nghĩa thống kê sinh học.
CHƯƠNG 3