IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.9. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Mộc h−ơng.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu mộc h−ơng gồm có 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 3 mẫu mua trên thị tr−ờng. Địa chỉ mẫu đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Mộc h−ơng theo h−ớng định tính các thành phần terpenoid, alcaloid, đ−ờng và acid amin, gồm các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
Dịch chiết methanol: 2g d−ợc liệu đ−ợc đ−ơc tán nhỏ tiến hành chiết với methanol theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b. Dịch chiết methanol. Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát hệ dung môi sắc ký và thuốc thử phát hiện theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần terpenoid, alcaloid, đ−ờng và acid amin.Cách tiến hành nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c. 3.3.2.1.d áp dụng cho định tính các thành phần trên. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc các hệ dung môi và thuốc thử phát hiện áp dụng cho định tính d−ợc liệu Mộc h−ơng nh− đã ghi ở phần c. Trong đó :
- Hệ dung môi: Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách các thành phần kém phân cực nh− tinh dầu và alcaloid; Hệ 2: Tách các thành phần đ−ờng và acid amin.
- Phát hiện : TT1 đ−ợc áp dụng phát hiện alcaloid; TT2 : Phát hiện terpenoid; TT3 : Phát hiện đ−ờng; TT4 : Phát hiện acid amin.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Mộc h−ơng đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C2.1, C 2.2.
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S 3.1, S 3.2, S3.3 .
Hệ dung môi :
- Hình 4.19. Hệ1 : Toluen: ethyl acetate ( 97 : 3).
- Hình 4.20. Hệ2 : N.propanol : ethylacetat : n−ớc : acid acetic ( 4 : 3 : 2 : 1).
Phát hiện :
- Hình 4.19. A. TT1 : Dragendorff- natrinitrit 10%.
B. TT2 : Anisaldehyd – acid sulfuric , sấy ở 800C. C. TT2 , sấy ở 1000C .
- Hình 4.20. A. TT3 : α Naphthol – acid sulfuric. B. TT4 : Ninhydrin.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.19 : Sắc ký đồ thể hiện định tính thành phần terpenoid, với hệ dung môi (Hệ1) th−ờng đ−ợc áp dụng tách các thành phần tinh dầu. Sắc ký đồ của mộc h−ơng cho các vết có khoảng giá trị Rf 0,3 – 0,45 có màu tím đỏ đặc tr−ng, màu xuất hiện ngay sau khi sấy ở nhiệt độ 800C (Hình 4.19A) và chuyển thành màu xanh ở nhiệt độ 1000 C ( Hình 4.19B). Ngoài ra, các thành phần này còn có thể đ−ợc phát hiện với thuốc thử khác nh− thuốc thử DNPH hoặc thuốc thử acid boric- acid oxalic, cho vết màu tím đỏ đặc tr−ng. Đặc biệt hơn nữa các thành phần ở cùng vị trí Rf này cũng cho màu với thuốc thử của alcaloid ( Hình 4.19C).
- Hình 4.20 : Sắc ký đồ định tính đ−ờng ( Hình 4.20A) và thành phần acid amin(Hình 4.20B). Hình ảnh sắc ký đồ đều thể hiện các vết có giá trị Rf và màu đặc tr−ng, là các thành phần có đ−ợc nói đến có trong d−ợc liệu Mộc h−ơng.
Kết quả hình ảnh các sắc ký đồ đã nêu đều thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu Mộc h−ơng đã khảo sát.
Phép thử đã xây dựng sẽ đ−ợc áp dụng để định tính phân biệt với Nam mộc h−ơng ( vỏ dụt, tai nghé ).