IV. Kết quả nghiên cứu.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Ba kích theo h−ớng định tính các thành phần anthranoid, gồm các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết phân đoạn ether ethylic và ethylacetat.
5g d−ợc liệu đã tán nhỏ đ−ợc tiến hành chiết lần l−ợt với các dung môi ether ethylic, ethylacetat theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.( Dịch chiết phân đoạn). Hoà các cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Dịch chiết phân đoạn ether ethylic đ−ợc áp dụng định tính anthranoid aglycon. Dịch chiết phân đoạn ethylacetat đ−ợc áp dụng định tính glycosid.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần thuộc nhóm anthranoid. Cách tiến hành nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c. và 3.3.2.1.d. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc các hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính d−ợc liệu Ba kích nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó :
- Hệ dung môi : Hệ 1: đ−ợc áp dụng tách các thành phần kém phân cực Hệ 2 : đ−ợc áp dụng tách các thành phần glycosid
- Thuốc thử : TT1 và TT2 thông th−ờng đ−ợc áp dụng phát hiện anthranoid
c. Kết quả :
Các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Ba kích đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ Hình 4.1.và Hình 4.2. Điều kiện phân tích nh− sau
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu (mẫu thu hái) : C 2.1, C2.2 Mẫu mua trên thị tr−ờng : S3.1, S3.2, S3.3
Hệ dung môi :
Hình 4.1: Hệ 1. Ether dầu: ethylacetat : acid acetic A, B. ( 75 : 2,5 : 0,5 )
C. (75 : 2,5 : 0,25)
Hình 4.2 : Hệ 2. N. butanol : acid acetic : n−ớc (5 : 1 : 4 ), lấy pha trên
Phát hiện:
Hình 4.1. A. UV 366nm
B; C. TT1 : Kali hydroxyd – ethanol Hình 4.2 : A. UV 254nm
B. TT2 : Acid boric – acid oxalic. Quan sát d−ới ánh sáng th−ờng . C. TT2. Quan sát d−ới UV 366nm
D. TT3 : Anisaldehyd – acid sulfuric
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.1 : Sắc ký đồ định tính thành phần anthranoid của Ba kích đ−ợc thể hiện là các vết có phát quang màu đỏ cam khi ch−a phun thuốc thử và có màu đỏ xuất hiện d−ới ánh sáng th−ờng sau khi phun thuốc thử (TT1).
Hình 4.1: Ba Kích. Sắc ký đồ SKLM.
Số l−ợng vết và độ đậm nhạt của mỗi vết trên sắc ký đồ thể hiện chất l−ợng của d−ợc liệu . Kết quả cho thấy mẫu C2.1 và C2.2 ( mẫu thu hái) có thành phần anthranoid nhiều hơn so với các mẫu mua trên thị tr−ờng. Vị trí của các vết có thay đổi khi thay đổi tỷ lệ thành phần dung môi sắc ký ( Hình 4.1C)
- Hình 4.2 : Với hệ dung môi phân cực tách các thành phần glycosid, sắc ký đồ thể hiện vết ở vị trí Rf 0,5 có hấp thụ ở b−ớc sóng 254nm (Hình 4.2.A); cho màu xanh đặc tr−ng với thuốc thử acid boric – acid oxalic ( đặc điểm này cũng thấy xuất hiện ở d−ợc liệu quả nhàu morinda citrifolia L. đ−ợc nói đến có thành phần anthranoid ) và có phát quang màu đỏ tối (Hình 4.2B, 4.2C). Đặc biệt thành phần này cũng cho màu xanh với thuốc thử anisaldehyd – acid sulphuric, thể hiện đặc điểm đặc tr−ng của Ba kích.
- Các đặc điểm đã xác định thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu Ba kích đã khảo sát. Số l−ợng và mật độ vết của các mẫu khảo sát khi tiến hành trong cùng điều kiện, có thể là cơ sở để so sánh và đánh giá chất l−ợng d−ợc liệu.
4.3.1.2. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Bồ công anh.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng đ−ợc áp dụng để so sánh. Địa chỉ mẫu đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Bồ công anh theo h−ớng định tính các nhóm chất flavonoid và terpenoid, gồm các b−ớc nh− sau
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
Dịch chiết ethylacetat : 1g d−ợc liệu tán nhỏ, đ−ợc tiến hành theo cách chiết nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b. (Dịch chiết với các dung môi). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần thuộc nhóm flavonoid và terpenoid . Cách tiến hành nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c và 3.3.2.1.d. Kết quả đã lựa chọn hệ dung môi và phát hiện áp dụng cho định tính Bồ công anh nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó :
- Hệ dung môi :Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách thành phần terpenoid của Bồ công anh Hệ 2 tách các thành phần dạng aglycon.
Hệ 3 tách các thành phần flavonoid dạng glycosid.
- Phát hiện: TT1 đ−ợc áp dụng phát hiện các thành phần thuộc nhóm flavonoid TT 2; TT3 : Phát hiện các thành phần terpenoid.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Bồ công anh đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ Hình 4.3 và Hình 4.4 ( tr. 49 ). Điều kiện phân tích nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu (mẫu thu hái) : C 2.1, C 2.2 Mẫu mua trên thị tr−ờng : S 3.1, S 3.2, S 3.3, S 3.4
Hệ dung môi :
Hình 4.3 : A. Hệ 2: Toluen: ethylacetat: aceton : acid formic (5 : 2 : 2 :1) B. Hệ 3: Ethylacetat : toluen : acid formic : n−ớc (100 :5 : 10 : 10) Hình 4.4 : A. Hệ 1: Toluen: ethylacetat: acid formic( 90 : 10 : 1)
B. Hệ 2
Phát hiện :
Hình 4.3 : TT 1 : Acid boric – acid oxalic + UV 366nm Hình 4.4 : A. TT 2 : Anisaldehyd – acid sulfuric.
B. TT 3 : Vanilin – acid phosphoric.