IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.12. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Lức (Sài hồ nam).
dụng để so sánh phân biệt. Sắc ký đồ Hình 4.24A thể hiện các vết có hấp thụ ở UV 254nm, đồng thời cũng cho màu với thuốc thử alcaloid ở Hình 4.24B, đặc điểm này là đặc tr−ng, phù hợp với thành phần alcaloid đã đ−ợc nói đến có trong ô d−ợc [3].
- Hình 4.25: Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính thành phần thuộc nhóm hợp chất phenolic, là các vết màu nâu và vàng với TT4(Hình 4.25C),đặc biệt có vết ở vị trí Rf 0,5 màu nâu đậm, thành phần này có hấp thụ ở UV254nm (Hình 4.25A) và phát quang d−ới UV366nm (Hình 4.25C),thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu.
4.3.1.12. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Lức ( Sài hồ nam). nam).
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Lức gồm có 3 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng, 2 mẫu mua có tên gọi là Sài hồ bắc đ−ợc áp dụng để so sánh (S1.1; S1.3). Địa chỉ mẫu đã đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Lức ( Sài hồ nam ) theo h−ớng định tính các thành phần terpenoid và flavonoid, gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết methanol: 2g d−ợc liệu đ−ợc đ−ơc tán nhỏ tiến hành chiết với methanol theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.(Dịch chiết methanol). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần thuộc nhóm terpenoid và flavonoid theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c. và 3.3.2.1.d. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc các hệ dung môi và thuốc thử áp dụng cho định tính d−ợc liệu nh− đã ghi ở phần c.
- Hệ dung môi: Hệ 1 và Hệ 2 : Đ−ợc áp dụng tách các thành phần kém phân cực ( terpenoid, genin, aglycon) ; Hệ 3 đ−ợc áp dụng tách flavonoid dạng glycosid.
- Phát hiện: TT1 : phát hiện terpenoid; TT2 và TT3 : phát hiện flavonoid.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Lức đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở Hình 4.26, Hình 4.27 và Hình 4.28 ( tr.75- 76 ). Điều kiện sắc ký nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C 2.1, C2.2 và C 2.3.
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S3.1, S3.2, S3.3, S3.4; Sài hồ(TQ): S1.1, S1.3
Hệ dung môi :
- Hình 4.26. Hệ1 : Toluen : ethylacetat (9 : 1).
- Hình 4.27. Hệ 2 : Toluen : ethylacetat : aceton : acid formic ( 15 : 2 : 2 : 1). - Hình 4.28. Hệ 3 : Ethylacetat : toluen : acid formic: n−ớc (100 : 5 : 10 : 10).
Phát hiện :
- Hình 4.26. A : UV366nm.
B . TT1 : Anisaldehyd – acid sulfuric. - Hình 4.27. A : UV 366nm.
B. TT2 : Acid boric- acid oxalic. - Hình 4.28. TT3 : NP/ PEG.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.26: Sắc ký đồ Hình 4.26B thể hiện phép thử định tính terpenoid, với hệ dung môi tách các thành phần kém phân cực và TT1, cho các vết (7 vết) có vị trí và màu sắc khác nhau đặc tr−ng cho d−ợc liệu. Mức độ đậm nhạt của các vết thể hiện chất l−ợng của d−ợc liệu. Sắc ký đồ ở Hình 4.26A quan sát d−ới UV 366nm tr−ớc khi phun thuốc thử thể hiện có các vết phát quang ở vùng Rf thấp đặc tr−ng.
- Hình 4.27: Sắc ký đồ quan sát d−ới UV366nm ở Hình 4.27A thể hiện các vết phát quang màu xanh đặc tr−ng cho d−ợc liệu, với Hệ 2, vị trí Rf và số l−ợng vết phát quang có thay đổi so với các vết ở sắc ký đồ Hình 4.26A . Các mẫu Sài hồ bắc S1.1, S1.3 có thành phần phát quang khác so với Lức ( Sài hồ nam). Đặc điểm khác nhau này cũng đ−ợc thể hiện sau khi phun thuốc thử acid boric- acid oxalic ( Hình 4.27 B ).
- Hình 4.28:Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính các thành phần flavonoid dạng gắn đ−ờng, gồm có các vết ( 3 vết) ở vùng Rf 0,1 – 0,3 phát quang màu xanh lục đặc tr−ng cho d−ợc liệu Lức. Đặc điểm này sẽ đ−ợc áp dụng để định tính phân biệt với Sài hồ bắc. Các mẫu thu hái thể hiện rõ các thành phần này trên sắc ký đồ, trong khi đó một số mẫu mua trên thị tr−ờng không thể hiện ( S3.1, S3.2, S3.3). Đặc điểm này có thể làm cơ sở để so sánh và đánh giá chất l−ợng d−ợc liệu.
Hình 4.23: Ô d−ợc. Sắc ký đồ SKLM.
Hình 4.25: Ô d−ợc. Sắc ký đồ SKLM
Hình 4.27: Lức (Sài hồ nam). Sắc ký đồ SKLM