IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.14. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Thảo quyết minh.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Thảo quyết minh gồm có 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 3 mẫu mua trên thị tr−ờng để áp dụng so sánh.
Địa chỉ mẫu đã đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Thảo quyết minh theo h−ớng định tính thành phần anthranoid, gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết methanol: 2g d−ợc liệu đ−ợc tán nhỏ đ−ợc tiến hành chiết với methanol theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.(Dịch chiết methanol). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10àl.
- Dịch chiết sản phẩm sau thuỷ phân :2g d−ợc liệu đã đ−ợc tán nhỏ đ−ợc chiết với methanol theo cách nh− đã ghi ở mục . 3.3.2.1.b.(Dịch chiết sản phẩm sau thuỷ phân). Hoà cắn thu đ−ợc trong 1ml chloroform, đ−ợc dung dịch chấm sắc ký định tính thành phần anthranoid dạng aglycon, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần anthranoid. Cách tiến hành nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1. c và 3.3.2.1. d. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc các hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính thảo quyết minh, nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó:
- Hệ dung môi :
Hệ 2 đ−ợc áp dụng tách các thành phần anthranoid dạng glycosid. - Phát hiện : TT1 và TT2 đ−ợc áp dụng phát hiện anthranoid.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Thảo quyết minh đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở Hình 4.31 và Hình 4.32 ( tr. 81 ) . Điều kiện sắc ký nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu: C 2.1, C2.2.; C2.1t , C2.2t →dịch chiết sau thuỷ phân. Mẫu mua trên thị tr−ờng: S3.1, S3.2, S3.3; S3.2t → dịch chiết sau thuỷ phân. Trong đó : Mẫu ch−a chế biến : C 2.1, C2.2, S3.2.
Mẫu đã chế biến : S 3.1, S.3.3.
Hệ dung môi :
- Hình 4.31. Hệ1 : Ether dầu : ethylacetat : acid formic (75 : 25 :5 )
- Hình 4.32. Hệ 2 : N. propanol: ethylacetat: acid acetic: n−ớc ( 3 : 4 : 1 : 2 )
Phát hiện :
- Hình 4.31. A . TT1: Kalihydroxyd / ethanol.
B. TT2 : Acid boric – acid oxalic, UV366nm. - Hình 4.32. A. TT2 ; B. TT2, UV366nm.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.31: Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính thành phần anthranoid dạng aglycon. Với TT1 các dẫn xuất anthraquinol th−ờng cho màu đỏ (Hình 4.31A). Sắc ký đồ của các mẫu sau thuỷ phân ( C2.2t và S3.5t) thể hiện các vết rõ hơn. Với TT2 và sấy ở 105 0 C, sắc ký đồ thể hiện 1 vết ở vị trí Rf 0,25 có phát quang màu vàng đặc tr−ng (Hình 4.31B), vết này chỉ xuất hiện ở các mẫu sau khi đ−ợc thuỷ phân, thành phần glycosid sẽ đứng tại chỗ.( mẫu C 2.1/ Hình 4.31B).
- Hình 4.32 : Sắc ký đồ thể hiện định tính anthranoid dạng glycosid, sau khi phun TT2 và sấy ở T0 1050C, thể hiện các vết phát quang vàng d−ới UV366nm ( Hình 4.32A) và có màu vàng d−ới ánh sáng th−ờng(Hình 4.32B). Các vết thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu thảo quyết minh, trong đó có 3 vết chính ở vùng Rf 0,3 – 0,7 đều xuất hiện ở các mẫu. Sắc ký đồ của các mẫu d−ợc liệu ch−a chế biến hoặc đã chế biến đều cho các vết t−ơng tự nhau.
- Các nhóm chất đã đ−ợc phát hiện thể hiện phù hợp với thành phần hoá học đã đ−ợc nói đến có trong d−ợc liệu Thảo quyết minh.