IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.11. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của ô d−ợc.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu ô d−ợc gồm có 3 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng Việt nam và 2 mẫu mua trên thị tr−ờng Trung Quốc. Địa chỉ các mẫu đã đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Hình 4.21: Nga truật. Sắc ký đồ SKLM.
định tính các thành phần terpenoid, alcaloid và hợp chất phenolic, gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết methanol:
2g d−ợc liệu đã đ−ợc tán nhỏ, tiến hành chiết với methanol theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.(Dịch chiết methanol) . Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol đ−ợc dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10àl .
- Dịch chiết chloroform trong môi tr−ờng kiềm.
2 gam d−ợc liệu đã đ−ợc tán nhỏ, tiến hành chiết theo ph−ơng pháp chiết alcaloid nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.(Dịch chiết chloroform trong môi tr−ờng kiềm). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 20 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện terpenoid, alcaloid và hợp chất phenolic. Cách tiến hành nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c. và 3.3.2.1.d. Kết quả đã lựa chọn các hệ dung môi và phát hiện áp dụng cho định tính d−ợc liệu ô d−ợc nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó :
- Hệ dung môi : Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách các thành phần kém phân cực nh− tinh dầu; Hệ 2 : Tách alcaloid và Hệ 3 : Tách thành phần thuộc nhóm hợp chất phenolic glycosid.
- Phát hiện : TT1 và TT2 đ−ợc áp dụng định tính terpenoid; TT3 : Phát hiện alcaloid và TT4 : Phát hiện hợp chất phenolic.
c. Kết quả.
Kết quả đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở Hình 4.23, Hình 4.24 và Hình 4.25 ( tr. 74- 75 ). Điều kiện phân tích nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C 2.1, C2.2, C 2.3.
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S3.1, S3.2, S3.3, S3.4.
S1.1, S1.2: ô d−ợc mua tại Trung Quốc.
Hệ dung môi :
- Hình 4.23. Hệ 1 : Ether dầu : ethylacetat (4 : 1).
- Hình 4.24. Hệ 2 : Chlorofoc : methanol : amoniac 25% (7 : 1 : 0,1).
- Hình 4.25. Hệ 3: Ethylacetat : acid acetic : acid formic: n−ớc (10 : 1 : 1 : 1)
Phát hiện :
- Hình 4.23. A.TT1: P.dimethylaminobensaldehyd-acid sulfuric ( không sấy) B. TT2 : Anisaldehyd – acid sulfuric, sấy ở nhiệt độ 900C. - Hình 4.24 . A : UV 254 nm.
B. TT3 : Dragendorff – acid Sulfuric 10%. - Hình 4.25. A : UV 254 nm.
B : UV 366 nm.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.23:Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính thành phần terpenoid. Với hệ dung môi ( Hệ 1 ) kém phân cực đ−ợc áp dụng tách các thành phần tinh dầu, Sắc ký đồ thể hiện các vết có màu sắc đặc tr−ng cho d−ợc liệu ô d−ợc với cả 2 loại thuốc thử. Sắc ký đồ Hình 4.23A có các vết xuất hiện ngay sau khi phun thuốc thử. Sắc ký đồ cũng cho các vết màu vàng và nâu đặc tr−ng với TT2 và sấy ở 900 C (Hình 4.23B).
- Hình 4.24 : Sắc ký đồ (Hình4.24B) thể hiện phép thử định tính alcaloid, cho các vết màu cam với thuốc thử dragendorff. Các mẫu thu hái C2.1, C2.2 thể hiện 2 vết chính ở vùng Rf 0,2-0,25, trong khi đó 2 mẫu d−ợc liệu S1.1 và S1.2 (TQ) xuất hiện thêm 2 vết màu đỏ cam sẫm ở vùng Rf 0,4 –