IV. Kết quả nghiên cứu.
4.3.1.19.Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Xa tiền tử.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.19.Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Xa tiền tử.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Xa tiền tử gồm có 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 3 mẫu mua trên thị tr−ờng đ−ợc áp dụng để so sánh.
Địa chỉ mẫu đã đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Xa tiền tử theo h−ớng định tính thành phần terpenoid glycosid và flavonoid. Thêm vào đó, tiến hành xác định, định tính aucubin – một thành phần hoạt chất nhóm iridoid (cũng thuộc nhóm terpenoid glycosid) đã đ−ợc biết có trong Xa tiền tử. Cách tiến hành gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết methanol- n−ớc : 2g d−ợc liệu tán nhỏ tiến hành chiết với hỗn hợp methanol và n−ớc tỷ lệ 4 : 1, theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1. b. (Dịch chiết methanol-n−ớc). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
- Dung dịch aucubin trong methanol làm đối chiếu, tỉ lệ 1mg/ml, l−ợng chấm 5 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần terpenoid glycosid và flavonoid nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c. và 3.3.2.1.d. đối với các nhóm chất đã nêu. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính Xa tiền tử nh− đã ghi ở phần c.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Xa tiền tử đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C 2.1, C2.2. Chất đối chiếu : Aucubin.
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S3.1, S3.2, S3.3. SLa → Mẫu d−ợc liệu lá mã đề, đ−ợc tiến hành cùng điều kiện để so sánh .
Hệ dung môi :
- Hình 4.41: Chloroform : methanol : acid acetic : n−ớc ( 70 : 30 : 1: 4 ). - Hình 4.42 : Ethylacetat : acid acetic : acid formic : n−ớc ( 10 : 1 : 1 : 1 ).
Phát hiện :
- Hình 4.41. A. TT1 : Anisaldehyd – acid sufuric , sấy 900C.
B. TT2 :Dimetylaminobenzaldehyd- acid hydrocloric , sấy 800C - Hình 4.42. A. TT3 : NP / PEG ; quan sát d−ới UV 366nm
B. TT4 : Acid boric- acid oxalic + nhiệt độ 1050C; quan sát d−ới UV 366nm.
C. TT5 : Nitro anilin diazo hoá.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.41 : Sắc ký đồ thể hiện của phép thử định tính terpenoid dạng glycosid ,với TT1, gồm các vết ở vùng Rf 0,3-0,5, thể hiện đặc tr−ng cho Xa tiền tử ( Hình 4.41A), aucubin cũng cho màu với thuốc thử này. Với TT2 đ−ợc áp dụng phát hiện các thành phần thuộc nhóm iridoid, sắc ký đồ thể hiện vết màu xanh đặc tr−ng, có vị trí Rf 0,35 t−ơng ứng với aucubin đối chiếu(Hình 4.41A). Đặc điểm này phù hợp với thành phần đã đ−ợc biết của Xa tiền tử.
- Hình 4.42: Sắc ký đồ thể hiện của phép thử định tính flavonoid, gồm có các vết ở khoảng Rf 0,6 cho phát quang màu vàng lục với TT3 (Hình 4.42A), phát quang màu xanh blue với TT4 (Hình 4.42 B) và cho màu vàng nâu với TT5 (Hình 4.42C).
- Kết quả hình ảnh các sắc ký đồ nh− đã nêu trên đều thể hiện đặc tr−ng cho các mẫu đã khảo sát. Kết quả sắc ký đồ của mẫu lá mã đề nh− đã nêu thể hiện khác, góp phần minh hoạ thêm về các đặc điểm đặc tr−ng đã xây dựng của Xa tiền tử.