IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.15. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Thổ phục linh.
a.Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Thổ phục linh gồm có 3 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng đ−ợc áp dụng để so sánh.
Hình 4.31: Thảo quyết minh. Sắc ký đồ SKLM.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Thổ phục linh theo h−ớng định tính các thành phần flavonoid, gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
Dịch chiết methanol: 2g d−ợc liệu tán nhỏ đ−ợc tiến hành chiết với methanol theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục3.3.2.1. b.(Dịch chiết methanol). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần flavonoid. Cách tiến hành theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục3.3.2.1. c và mục 3.3.2.1.d đối với các nhóm chất nh− đã nêu trên. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc các hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính d−ợc liệu Thổ phục linh nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó:
- Hệ dung môi: Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách thành phần aglycon; Hệ 2 tách glycosid.
- Phát hiện: TT1 và TT2 phát hiện flavonoid ; TT3 và TT4 đ−ợc áp dụng phát hiện các hợp chất phenolic.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Thổ phục linh đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở
Hình 4.33 và Hình 4.34 ( tr. 83 ) . Điều kiện sắc ký nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C 2.1, C2.2, C 2.3.
Mẫu mua tên thị tr−ờng : S 3.1, S3.2, S3.3, S3.4.
Hệ dung môi :
- Hình 4.33. Hệ 1 : Toluen: ethyl acetate: acetone: acid formic ( 5 : 2 : 2 : 1). - Hình 4.34. A. Hệ 1
B. Hệ 2 : Ethylacetat: toluen: acid formic: n−ớc (100: 5 : 10 : 10).
Phát hiện :
- Hình 4.33. A. TT1 : Acid boric- acid oxalic, UV366nm. B. C. TT2 : NP / PEG , UV 366nm.
- Hình 4.34. A. TT3 : Vanilin – acid sulfuric. B. TT4 : Vanilin – acid phosphoric.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.33: Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính flavonoid, với TT1 cho vết ở khoảng Rf 0,2 có phát quang màu vàng lục d−ới UV366nm ( Hình 4.33A), vết này có phát quang màu nâu đỏ với thuốc thử NP/PEG(Hình 4.33B) đặc tr−ng cho Thổ phục linh. Ngoài ra sắc ký đồ Hình 4.33.B còn thể hiện các thành phần flavonoid khác có phát quang màu xanh sáng.
Hình 4.33: Thổ phục linh. Sắc ký đồ SKLM
Sắc ký đồ Hình 4.33C thể hiện các vết t−ơng tự, đ−ợc tách ở vị trí Rf cao hơn, khi triển khai sắc ký với hệ dung môi có thêm thành phần phân cực. Kết quả sắc ký đồ đều cho các vết t−ơng tự nh− nhau trên các mẫu thu hái và mẫu mua trên thị tr−ờng, riêng mẫu S3.1 ( mẫu lấy ở Lạng sơn có hình thức khác), có các vết khác với Thổ phục linh.
- Hình 4.34: Sắc ký đồ đ−ợc tách với các hệ dung môi giống Hình 4.33A. Vết ở vị trí Rf 0,2 có phát quang với các thuốc thử của flavonoid, đồng thời cho màu đỏ cam với TT3 và TT4, thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu. Các thành phần nhóm flavanol th−ờng có màu t−ơng tự với thuốc thử này (ví dụ hesperidin...).Thành phần astilbin, isoastilbin… đã đ−ợc nói đến có trong thổ phục linh thuộc nhóm flavanol .
- Kết quả các hình ảnh sắc ký đồ đã nêu thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu thổ phục linh đã khảo sát và đ−ợc áp dụng để định tính trong một số chế phẩm thuốc đông d−ợc.