IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.20. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Xuyên khung.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng trong đó có 1 mẫu mua tại TQ. Địa chỉ mẫu đã đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Xuyên khung theo h−ớng định tính alcaloid và hợp chất phenolic. Thêm vào đó, việc khảo sát định tính 2 nhóm chất đã nêu đ−ợc tiến hành theo định h−ớng tìm 2 thành phần chất cụ thể đã đ−ợc biết có trong d−ợc liệu Xuyên khung, đó là: Khảo sát định tính alcaloid theo h−ớng tìm tetramethylpyrazin và định tính hợp chất phenolic theo h−ớng tìm acid ferulic. Cách tiến hành gồm các b−ớc nh− sau :
Hình 4.41: Xa tiền tử. Sắc ký đồ SKLM.
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
- Dịch chiết methanol : 2g d−ợc liệu đ−ợc tiến hành chiết với methanol theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1. b.(Dịch chiết methanol). Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol đ−ợc dung dịch chấm sắc ký. Dịch chiết methanol đ−ợc áp dụng định tính thành phần hợp chất phenolic, l−ợng chấm 10àl.
- Acid caffeic : Dung dịch 0,05% trong methanol, chất đại diện cho nhóm acid phenolcarboxylic, dùng để so sánh áp dụng định tính định h−ớng tìm acid ferulic.
- Dịch chiết phân đoạn n. hexan: 2g d−ợc liệu sau khi đã đ−ợc tán nhỏ, đ−ợc tiến hành chiết theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1. b.(Dịch chiết phân đoạn). Hoà cắn thu đ−ợc 1ml methanol, đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký định tính alcaloid, l−ợng chấm 20àl.
Hệ dung môi sắc ký và thuốc thử phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng định tính các thành phần hợp chất phenolic và alcaloid nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c 3.3.2.1.d. đối với các nhóm chất đã nêu. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính Xuyên khung nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó:
- Hệ dung môi :
Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách các thành phần kém phân cực, đặc biệt hệ này đã đ−ợc áp dụng tách thành phần alcaloid của Xuyên khung.
Hệ 2 đ−ợc áp dụng tách các thành phần hợp chất phenolic và coumarin
- Phát hiện :TT1 đ−ợc áp dụng phát hiện alcaloid; TT2: Hợp chất phenolic (acid phenolcarboxylic ).
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Xuyên khung đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở
Hình 4.43 và Hình 4.44 ( tr. 95 ). Điều kiện sắc ký nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C2.1, C 2.2
Chất so sánh : acid caffeic, ký hiệu Caf
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S 3.1, S 3.2, S 3.3 và S1.1 (TQ)
Hệ dung môi :
- Hình 4.43. Hệ 1 : N hexan : ethylacetat (7 : 3).
- Hình 4.44. Hệ 2 : Toluen: ethyl acetate: acetone: acid formic( 15 : 2 : 2 : 1).
Phát hiện :
- Hình 4.43: A. UV 366nm.
B. TT1: Dragendorff - acid sulfuric 10% trong ethanol. - Hình 4.44: A. UV 366nm.
Hình 4.43: Xuyên khung. Sắc ký đồ SKLM.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.43.A: Sắc ký đồ có 1 vết phát quang màu xanh sáng ở vị trí Rf 0,5, thể hiện đặc tr−ng, thành phần này chiếm tỷ lệ lớn trong phân đoạn kém phân cực.
- Hình 4.43.B : Sắc ký đồ thể hiện của phép thử định tính alcaloid, với hệ dung môi kém phân cực ( Hệ 1), gồm có 2 vết chính nằm trong khoảng Rf 0,40 – 0,55 thể hiện đặc tr−ng của Xuyên khung. Các thành phần alcaloid này cũng đ−ợc phát hiện trong phân đoạn cất kéo theo hơi n−ớc. Đặc điểm này sẽ đ−ợc tiếp tục khai thác, áp dụng định tính bằng kỹ thuật SKLCA, ở phần sau.
- Hình 4.44: Sắc ký đồ thể hiện phép thử định tính định h−ớng phát hiện acid ferulic, một thành phần hoạt chất đã đ−ợc biết có trong Xuyên khung, acid caffeic thuộc cùng nhóm acid phenolcarbocylic với acid ferulic; cùng thể hiện các đặc điểm đặc tr−ng của nhóm, nh− cho phát quang d−ới UV366nm ( Hình 4.44A); cho màu đỏ với TT2 ( Hình 4.44B). Ngoài ra các thành phần này cũng cho màu với thuốc thử của nhóm phenolic nh− nitroanilin diazo hoá cho vết có màu nâu vàng.
- Các đặc điểm đã xác định theo ph−ơng pháp nh− đã nêu đều thể hiện đặc tr−ng cho các mẫu d−ợc liệu Xuyên khung đã khảo sát.