IV. Kết quả nghiên cứu.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét
4.3.1.6. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Đảng sâm.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Đảng sâm gồm 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng. Địa chỉ mẫu đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Đảng sâm theo h−ớng định tính các thành phần terpenoid và đ−ờng, gồm có các b−ớc nh− sau :
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
Tiến hành xử lý mẫu theo h−ớng chiết terpenoid và đ−ờng, gồm có các dịch chiết nh− sau:
- Dịch chiét phân đoạn chloroform và phân đoạn ethylacetat :
3g d−ợc liệu tán nhỏ, đ−ợc tiến hành chiết phân đoạn với các dung môi nói trên, theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b.(Dịch chiết phân đoạn). Hoà lần l−ợt các cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dung dịch sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Dịch chiết phân đoạn chloroform đ−ợc áp dụng cho định tính các thành phần kém phân cực nh− terpenoid ( cho sắc ký đồ Hình 4.13.A)
Dịch chiết phân đoạn ethylacetat đ−ợc áp dụng cho định tính thành phần glycosid ( Hình 4.13.B).
- Dịch chiết methanol- n−ớc :
3g d−ợc liệu đ−ợc tiến hành chiết với methanol- n−ớc theo cách nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b. (Dịch chiết methanol-n−ớc). Cô dịch chiết thu đ−ợc đến gần cạn, hoà cắn thu đ−ợc trong 10ml methanol, đ−ợc dung dịch chấm sắc ký định tính thành phần đ−ờng của d−ợc liệu, l−ợng chấm 10àl (Hình 4.14).
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần terpenoid và đ−ờng nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.c và 3.3.2.1.d. Kết quả đã lựa chọn đ−ợc hệ dung môi và thuốc thử phát hiện áp dụng cho định tính Đảng sâm nh− đã ghi ở phần c.
Trong đó :
- Hệ dung môi : Hệ 1 đ−ợc áp dụng tách các thành phần terpenoid; Hệ2 tách các thành phần glycosid và đ−ờng
- Phát hiện : TT1 và TT2 đ−ợc áp dụng phát hiện các thành phần terpenoid, TT3 : phát hiện đ−ờng , TT4: phát hiện đ−ờng khử.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Đảng sâm đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở
Hình 4.13 và Hình 4.14( tr. 60 ).Điều kiện phân tích nh− sau:
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu( mẫu thu hái): C2.1, C 2.2. Chất đối chiếu glucoza ký hiệu : G
Mẫu mua trên thị tr−ờng : S 3.1, S 3.2, S 3.3, S3.4
Hệ dung môi :
- Hình 4.13: A. Hệ1: Toluen: ethyl acetate: acetone: acid formic (15: 2: 2: 1) B. Hệ 2: Chloroform : methanol : n−ớc ( 70 : 30 : 4)
- Hình 4.14 : Hệ 2
Phát hiện :
- Hình 4.13 : A. TT1: Anisaldehyd – acid sulfuric. B. TT2 : Vanilin – acid sulfuric. - Hình 4.14 : A. TT3 : α Naphthol – acid sulfuric.
B . TT4 : Tetrazolium blue.