III. Đối t−ợng và ph−ơng pháp nghiên cứu 3.1 Đối t−ợng nghiên cứu.
f. Kết quả phân tích sàng lọc
Kết quả phân tích sàng lọc hoá học của d−ợc liệu bao gồm :
- Tên nhóm chất đã đ−ợc phát hiện (alcaloid, anhtranoid, flavonoid, terpenoid .. ), số l−ợng nhóm chất đ−ợc phát hiện từ d−ợc liệu
- Cung cấp các thông tin có liên quan cho việc xác định các đặc điểm đặc tr−ng của của nhóm chất nh− : Hệ dung môi tách nhóm chất thuộc hệ phân cực hay kém phân cực, đặc điểm màu sắc của vết tạo thành trên sắc ký đồ, tỉ lệ các thành phần đã đ−ợc phát hiện đó nhiều hay ít… là cơ sở cho định h−ớng tìm hệ dung môi tách thích hợp, lựa chọn thuốc thử đặc tr−ng, ph−ơng pháp chiết mẫu và l−ợng mẫu phù hợp.
3.3.2. Phân tích xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu.
Phân tích xác định các đặc điểm đặc tr−ng của d−ợc liệu ch−a xác định hoạt chất dựa trên cơ sở xác định các đặc điểm đặc tr−ng của nhóm chất.
Tiến hành khai thác tìm và xác định các đặc điểm đặc tr−ng dạng “vân tay” nhóm chất của d−ợc liệu gồm có :
- Khảo sát xác định “vân tay” của các nhóm chất, đã đ−ợc phát hiện sơ bộ từ kết quả phân tích sàng lọc của d−ợc liệu : Sau khi đã nhận biết một số nhóm chất của d−ợc liệu thông qua kết quả phân tích sàng lọc, b−ớc tiếp theo là tiến hành khảo sát kỹ hơn điều kiện phân tích từng nhóm chất cụ thể đó. Tiến hành khảo sát và xây dựng các thông số có liên quan đến xác định đặc điểm đặc tr−ng của nhóm chất nh− : cách xử lý mẫu, l−ợng mẫu, loại pha tĩnh, hệ dung môi sắc ký, cách phát hiện và thuốc thử phát hiện; sao cho thành phần của nhóm chất đ−ợc thể hiện trên sắc ký đồ là đặc tr−ng cho d−ợc liệu.
- Tiến hành khai thác thêm các đặc điểm đặc tr−ng của nhóm chất theo h−ớng tìm thành phần hoạt chất hoặc chất cụ thể đặc tr−ng đã đ−ợc biết có trong d−ợc liệu khảo sát (nếu có). Theo cách này đã áp dụng trong một số tr−ờng hợp cụ thể, khi thành phần chất cụ thể cần tìm đó đ−ợc biết có tính chất đặc tr−ng riêng biệt ngoài tính chất chung của nhóm chất, ví dụ , áp dụng xác định vân tay nhóm chất theo h−ớng tìm thành phần stilben glycosid trong Hà thủ ô, căn cứ vào các đặc điểm đặc tr−ng riêng biệt của nó ( có phát quang và cho màu đặc tr−ng với thuốc thử acid phosphomolipdic/ acid sulfuric) để xác định; xác định vân tay nhóm chất theo h−ớng tìm pinoresinol glycosid trong đỗ trọng, tìm alcaloid bay hơi có trong Xuyên khung… Xác định đặc điểm đặc tr−ng của nhóm chất theo h−ớng tìm thành phần hoạt chất hoặc chất cụ thể này sẽ góp phần bổ sung khả năng tìm và xác định xác điểm đặc tr−ng nhóm chất của d−ợc liệu đó.
3.3.2.1. Phân tích xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu bằng ph−ơng pháp sắc ký lớp mỏng ( SKLM). bằng ph−ơng pháp sắc ký lớp mỏng ( SKLM).
Tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm đặc tr−ng của nhóm chất có trong d−ợc liệu, gồm có khảo sát các yếu tố liên quan đến xây dựng một phép thử định tính “vân tay” nhóm chất nh− sau :
a. Pha tĩnh :
Silicagel G F 254 Merck, bản tráng sẵn đ−ợc hoạt hoá ở nhiệt độ 105 0 C trong 1 giờ tr−ớc khi sử dụng.