IV. Kết quả nghiên cứu.
a. Đối t−ợng mẫu khảo sát.
4.3.1.17. Xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của Tô mộc.
a. Mẫu khảo sát.
Tiến hành khảo sát trên các mẫu Tô mộc gồm có 2 mẫu d−ợc liệu thu hái, 4 mẫu mua trên thị tr−ờng đ−ợc áp dụng để so sánh, trong đó có một mẫu của Trung Quốc. Địa chỉ mẫu đ−ợc ghi ở phụ lục 2.
b. Khảo sát các điều kiện phân tích.
Dựa vào kết quả phân tích sàng lọc theo nhóm chất, tiến hành khảo sát xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Tô mộc theo h−ớng định tính thành phần flavonoid, gồm có các b−ớc nh− sau :
Hình 4.36: Tiền hồ. Sắc ký đồ SKLM. Hình 4.35: Tiền hồ. Sắc ký đồ SKLM.
Chuẩn bị mẫu chấm sắc ký:
Dịch chiết methanol:2g d−ợc liệu tán nhỏ tiến hành chiết với methanol theo ph−ơng pháp nh− đã ghi ở mục 3.3.2.1.b. (Dịch chiết methanol) . Hoà cắn thu đ−ợc trong 2ml methanol, đ−ợc dùng làm dung dịch chấm sắc ký, l−ợng chấm 10 àl.
Hệ dung môi sắc ký và phát hiện:
Tiến hành khảo sát theo h−ớng tách và phát hiện các thành phần flavonoid nh− đã ghi ở mục. 3.3.2.1.c và 3.3.2.1.d. áp dụng đối với flavonoid . Kết quả đã lựa chọn đ−ợc hệ dung môi và cách phát hiện áp dụng cho định tính tô mộc nh− đã ghi ở phần c.
c. Kết quả.
Kết quả xác định các đặc điểm hoá học đặc tr−ng của d−ợc liệu Tô mộc đ−ợc thể hiện trên các hình ảnh sắc ký đồ ở Hình 4.37 và Hình 4.38 ( tr.88 ).
Điều kiện sắc ký nh− sau :
Mẫu chấm sắc ký :
Mẫu nghiên cứu : C 2.1, C2.2.
Mẫu mua trên thị tr−ờng: S 3.1, S3.2, S3.3. Mẫu TQ : ký hiệu S1.1.
Hệ dung môi :
- Hình 4.37: Toluen : ethylacetat : aceton : acid formic ( 5 : 2 : 2 : 1) - Hình 4.38: Giống Hình 1
Phát hiện :
- Hình4.37. A. TT1 : Acid boric – acid oxalic , quan sát d−ới ánh sáng th−ờng. B. TT1 : Quan sát d−ới UV366nm.
- Hình 4.38. A : UV366nm.
B : Kalihydroxyd / ethanol + quan sát d−ới UV366nm. C : Kalihydroxyd / ethanol.
d. Đánh giá kết quả và nhận xét.
- Hình 4.37: Sắc ký đồ thể hiện của phép thử định tính flavonoid, có một vết chính ở khoảng vị trí Rf 0,3, màu đỏ với thuốc thử acid boric – acid oxalic (Hình 4.37A) và có phát quang màu đỏ cam (Hình 4.37 B), thể hiện đặc tr−ng cho d−ợc liệu Tô mộc. Mức độ đậm nhạt của vết này có khác nhau ở các mẫu, trong đó mẫu thu hái ( ký hiệu C2.2) và mẫu của TQ (ký hiệu S1.1), với l−ợng chấm mẫu có độ pha loãng gấp 5 lần so với các mẫu khác, thể hiện là mẫu có chất l−ợng tốt. Sắc ký đồ còn thể hiện các vết khác có phát quang màu xanh, đều xuất hiện ở các mẫu khảo sát.
- Hình4.38: Sắc ký đồ có các vết phát quang màu xanh ở vùng Rf 0,3 – 0,5 .Thành phần có màu đỏ và phát quang đỏ ở Hình 4.37, đ−ợc thể hiện ở sắc ký đồ này là vết có màu đỏ tím với thuốc thử Kalihydroxyd / ethanol (Hình 4.37C) và có phát quang màu vàng lục d−ới UV366nm ( Hình 4.37B) thể hiện dặc tr−ng cho d−ợc liệu Tô mộc. Đặc điểm này phù hợp với tính chất đã đ−ợc mô tả của thành phần brazilin [2], một thành phần hoạt chất chính đ−ợc nói đến có trong Tô mộc.
Hình 4.38: Tô mộc. Sắc ký đồ SKLM. Hình 4.37: Tô mộc. Sắc ký đồ SKLM.