- Bảo quản: quá trình bảo quản hạt giống cũng là giai đoạn mà nấm bệnh có
3.3.4.3. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ và môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm B oryzae
cấy đến sự phát triển của nấm B. oryzae
- Từ nguồn nấm B. oryzae thuần phân lập được, đem cấy trên môi trường PGA rồi đặt ở các ngưỡng nhiệt độ khác nhau: 10oC, 15oC, 20oC, 25oC, 30oC, 35oC, 40oC. Mỗi ngưỡng nhiệt độ có 4 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 3 đĩa petri.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy nhân tạo đến sự phát triển của nấm: đổ 3mm3 môi trường/đĩa petri đường kính 9cm, cấy nấm B. oryzae và nuôi ở ngưỡng nhiệt độ 250C trong 7 ngày.
- Thành phần các loại môi trường theo các tài liệu của: Shoemarker (1962), Alcorn (1983), Imam and Schroeder (1966), Hau and Rush (1980), Das and Baruah (1947), Tanaka (1956), Misra and Mukarjee (1962).
- Chuẩn bị môi trường RLPA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Khoai tây 200 gram
+ Lá lúa 100 gram + Agar 20 gram + Nước cất 1000 ml
- Chuẩn bị môi trường MEA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Malt extract 20 gram
+ Pepton 1 gram + Glucose 20 gram + Agar 20 gram + Nước cất 1000 ml
- Chuẩn bị môi trường RPA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Gạo 20 gram
+ Agar 20 gram + Nước cất 1000 ml
- Chuẩn bị môi trường RBLA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Cám gạo 20 gram
+ Lá lúa 50 gram + Agar 20 gram
+ Nước cất 1000 ml
- Chuẩn bị môi trường RTA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Bẹ lúa 100 gram
+ Agar 20 gram + Nước cất 1000 ml
- Chuẩn bị môi trường RLA: thành phần gồm có (cho 1 lít môi trường): + Lá lúa 100 gram
+ Agar 20 gram + Nước cất 1000 ml
Môi trường được hấp khử trùng ở 1300C tại 1,2 atmotphe trong 20 phút.
- Theo dõi sự phát triển của nấm ở các ngưỡng nhiệt độ sau 1, 2, 3, 4, 5 ngày nuôi cấy bằng cách đo đường kính tản nấm, đơn vị đo (mm). Xác định mức nhiệt độ thuận lợi và mức nhiệt độ ức chế sự phát triển của nấm.
- Theo dõi sự phát sinh bào tử hàng ngày bằng cách thêm 5 ml nước lắc 5 phút, thu dịch bào tử, sau đó đem đếm bào tử bằng buồng đếm. Các đĩa nấm sau khi thu bào tử tiếp tục giữ tới các ngày sau để theo dõi tiếp. Lặp lại các bước để theo dõi sự phát triển của nấm và phát sinh bào tử.
- Đếm bào tử nấm: Lượng bào tử sinh ra được đếm bằng cách pha loãng trong dung dịch nước muối 0,09%. Buồng đếm Marienfeld có độ sâu 0,200mm, diện tích ô 0,0625mm2. Lượng bào tử được đếm ở các ngày nuôi cấy thứ 4, 5, 6, 7.